Clonagem, expressão e purificação de glicosil hidrolases (GH5 e GH45) provenientes do fungo Gloeophyllum trabeum e estudo da ação das proteínas como auxiliares na hidrólise de polissacarídeos (2016)
- Authors:
- Autor USP: BERTO, GABRIELA LEILA - EEL
- Unidade: EEL
- Sigla do Departamento: LOT
- Subjects: CLONAGEM; ENZIMAS HIDROLÍTICAS
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Fungos de podridão branca e fungos de podridrão parda são capazes de degradar a biomassa lignocelulósica utilizando diferentes mecanismos. Os fungos de podridão parda degradam a celulose e a hemicelulose enquanto modificam a lignina, sendo, portanto, as enzimas hidrolíticas ativas em substrato rico em lignina. O arsenal enzimático diferenciado desses fungos torna-os alvos para prospecção de enzimas que podem ser aplicadas em diversos processos biotecnológicos. O fungo Gloeophyllum trabeum é uma das espécies mais compreendidas deste grupo, e sabe-se que é capaz de degradar a celulose sem produzir CBHs. Além disso já foi reportado uma GH5 proveniente desse organismo com caraterísticas processivas. Nossa tentativa de clonagem dessa enzima (GtGH5) em A. nidulans A773 não foi bem sucedida, todavia nosso grupo esta repetindo os passos de clonagem e expressão. No genoma desse organismo esta presente um gene que codifica uma GH45. A GtGH45 foi a clonada e expressa com alto rendimento em A. nidulans cepa A773. A expressão, secreção e acumulaçao da GtGH45 foi positiva após 72 h de incubação em meio líquido (maltose como indutor), confirma por eletroforese SDS-PAGE do extrato enzimático concentrado e dialisado. A massa molar de 18,4 kDa foi consistente com a predição da sequência de 204 amino-ácidos obtída apartir da sequência gênica e corrobora com a caracterização por espectometria de massas (18,9 kDa). A análise filogenética é consistente com estudos anteriores, agrupando a proteína alvo com outras GH45s de basidiomicetos na subfamília C. A enzima purificada foi testada para determinação da especificidade pelo substrato apresentando maior atividade em arabinoxilana, xilana, arabinoxilana e CMC e foi capaz de gero celo-oligômeros a partir da hidrólise de PASC. O pH ótimo em CMC foi 2,5, além se demonstrar ser temoestável em ensaio de Thermoflour. A hidrólise enzimática desubstratos lignocelulósicos derivados de cana-de-açúcar mostrou que a GtGH45 foi eficiente para suplementar coqueteis enzimáticos comerciais, principalmente na conversão de xilana
- Imprenta:
- Data da defesa: 04.02.2016
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ABNT
BERTO, Gabriela Leila. Clonagem, expressão e purificação de glicosil hidrolases (GH5 e GH45) provenientes do fungo Gloeophyllum trabeum e estudo da ação das proteínas como auxiliares na hidrólise de polissacarídeos. 2016. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Lorena, 2016. . Acesso em: 10 fev. 2026. -
APA
Berto, G. L. (2016). Clonagem, expressão e purificação de glicosil hidrolases (GH5 e GH45) provenientes do fungo Gloeophyllum trabeum e estudo da ação das proteínas como auxiliares na hidrólise de polissacarídeos (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Lorena. -
NLM
Berto GL. Clonagem, expressão e purificação de glicosil hidrolases (GH5 e GH45) provenientes do fungo Gloeophyllum trabeum e estudo da ação das proteínas como auxiliares na hidrólise de polissacarídeos. 2016 ;[citado 2026 fev. 10 ] -
Vancouver
Berto GL. Clonagem, expressão e purificação de glicosil hidrolases (GH5 e GH45) provenientes do fungo Gloeophyllum trabeum e estudo da ação das proteínas como auxiliares na hidrólise de polissacarídeos. 2016 ;[citado 2026 fev. 10 ] - Pré-tratamentos bioquímicos para isolamento de celulose nanofibrilada
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