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Remoção de endotoxina presente em meio fermentado contendo biomoléculas utilizando sistemas micelares de duas fases aquosas (2010)

  • Authors:
  • USP affiliated author: LOPES, ANDRé MORENI - FCF
  • School: FCF
  • Subjects: PROTEÍNAS (SEPARAÇÃO); ENDOTOXINAS; ESCHERICHIA COLI
  • Language: Português
  • Abstract: Foi investigada a utilização de Sistema Micelar de Duas Fases Aquosas (SMDFA) para remoção de lipolissacarídeos (LPS) de preparações contendo proteínas recombinantes de interesse farmacêutico, como a proteína verde fluorescente (GFPuv). Os SMDFA são constituídos por soluções de tensoativos contendo micelas e oferecem ambientes hidrofóbico e hidrofílico, que possibilitam seletividade na partição de biomoléculas de acordo com sua hidrofobicidade, permitindo a remoção de LPS contaminante. Neste trabalho, foi realizada a implementação do método para a quantificação de LPS em amostras contaminadas e a obtenção de LPS e GFPuv puros a partir de cultivo de E. coli recombinante. Além disso, foi estudada a influência do Triton X-114 na metodologia de quantificação de LPS, e a adição de Mg´SOIND.4´, Ca´ClIND.2´, KI e (´NHIND.4´)IND.2´´SOIND.4´ na partição de GFPuv e LPS puros em SMDFA. E ainda, realizou-se um planejamento experimental (´2POT.2´) para avaliar os maiores ´KIND.GFPuv´ e %´RECIND.GFPuv´. O homogeneizado celular de E. coli foi testado nas melhores condições obtidas com o planejamento experimental. E finalmente, o processo por cromatografia de afinidade por íons metálicos (IMAC) foi empregado para investigar a adsorção de LPS em matriz IDA-´CaPOT.2+´. Conforme os resultados obtidos, o TX-114 causou elevada interferência no método cinético cromogênico, em função da similaridade desta molécula com os LPS. Os LPS apresentaram partição preferencial para a fase concentrada em micelas, com altos valores de remoção, %´REMIND.LPS´>98,0%. Aocontrário, a GFPuv foi recuperada preferencialmente na fase diluída, na qual existe maior volume disponível, resultando em valores de ´KIND.GFPuv´>1. A adição de sais ocasionou diminuição nos valores ´KIND.GFPuv´, provavelmente por causa da carga negativa que GFPuv adquiriu nas condições avaliadas. Os resultados do planejamento experimental mostraram que a melhor condição de partição obtida foi na região do ponto central, 4,0% (p/p) a 60,0°C, com ´KIND.GFPuv´>10. O processo por IMAC apresentou as maiores capacidades de adsorção de LPS-IDA-´CaPOT.+2´ nas condições de menor pH e maior força iônica 4,0 e 1,0 mol/L, respectivamente. O processo de purificação por SMDFA empregado para a remoção de LPS contaminante presente em meio fermentado contendo GFPuv, demonstrou ser eficiente em recuperar a biomolécula-alvo na fase diluída e separar o principal contaminante na fase rica em micelas. Portanto, pode ser empregado como primeira etapa para a remoção de altas concentrações de LPS na purificação de proteínas hidrofílicas como a GFPuv
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 20.08.2010
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    • ABNT

      LOPES, André Moreni; PESSOA JUNIOR, Adalberto. Remoção de endotoxina presente em meio fermentado contendo biomoléculas utilizando sistemas micelares de duas fases aquosas. 2010.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2010. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9135/tde-21012011-164951/ >.
    • APA

      Lopes, A. M., & Pessoa Junior, A. (2010). Remoção de endotoxina presente em meio fermentado contendo biomoléculas utilizando sistemas micelares de duas fases aquosas. Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9135/tde-21012011-164951/
    • NLM

      Lopes AM, Pessoa Junior A. Remoção de endotoxina presente em meio fermentado contendo biomoléculas utilizando sistemas micelares de duas fases aquosas [Internet]. 2010 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9135/tde-21012011-164951/
    • Vancouver

      Lopes AM, Pessoa Junior A. Remoção de endotoxina presente em meio fermentado contendo biomoléculas utilizando sistemas micelares de duas fases aquosas [Internet]. 2010 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9135/tde-21012011-164951/


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