Remoção de endotoxina presente em meio fermentado contendo biomoléculas utilizando sistemas micelares de duas fases aquosas (2010)
- Authors:
- Autor USP: LOPES, ANDRé MORENI - FCF
- Unidade: FCF
- Subjects: PROTEÍNAS (SEPARAÇÃO); ENDOTOXINAS; ESCHERICHIA COLI
- Language: Português
- Abstract: Foi investigada a utilização de Sistema Micelar de Duas Fases Aquosas (SMDFA) para remoção de lipolissacarídeos (LPS) de preparações contendo proteínas recombinantes de interesse farmacêutico, como a proteína verde fluorescente (GFPuv). Os SMDFA são constituídos por soluções de tensoativos contendo micelas e oferecem ambientes hidrofóbico e hidrofílico, que possibilitam seletividade na partição de biomoléculas de acordo com sua hidrofobicidade, permitindo a remoção de LPS contaminante. Neste trabalho, foi realizada a implementação do método para a quantificação de LPS em amostras contaminadas e a obtenção de LPS e GFPuv puros a partir de cultivo de E. coli recombinante. Além disso, foi estudada a influência do Triton X-114 na metodologia de quantificação de LPS, e a adição de Mg´SOIND.4´, Ca´ClIND.2´, KI e (´NHIND.4´)IND.2´´SOIND.4´ na partição de GFPuv e LPS puros em SMDFA. E ainda, realizou-se um planejamento experimental (´2POT.2´) para avaliar os maiores ´KIND.GFPuv´ e %´RECIND.GFPuv´. O homogeneizado celular de E. coli foi testado nas melhores condições obtidas com o planejamento experimental. E finalmente, o processo por cromatografia de afinidade por íons metálicos (IMAC) foi empregado para investigar a adsorção de LPS em matriz IDA-´CaPOT.2+´. Conforme os resultados obtidos, o TX-114 causou elevada interferência no método cinético cromogênico, em função da similaridade desta molécula com os LPS. Os LPS apresentaram partição preferencial para a fase concentrada em micelas, com altos valores de remoção, %´REMIND.LPS´>98,0%. Aocontrário, a GFPuv foi recuperada preferencialmente na fase diluída, na qual existe maior volume disponível, resultando em valores de ´KIND.GFPuv´>1. A adição de sais ocasionou diminuição nos valores ´KIND.GFPuv´, provavelmente por causa da carga negativa que GFPuv adquiriu nas condições avaliadas. Os resultados do planejamento experimental mostraram que a melhor condição de partição obtida foi na região do ponto central, 4,0% (p/p) a 60,0°C, com ´KIND.GFPuv´>10. O processo por IMAC apresentou as maiores capacidades de adsorção de LPS-IDA-´CaPOT.+2´ nas condições de menor pH e maior força iônica 4,0 e 1,0 mol/L, respectivamente. O processo de purificação por SMDFA empregado para a remoção de LPS contaminante presente em meio fermentado contendo GFPuv, demonstrou ser eficiente em recuperar a biomolécula-alvo na fase diluída e separar o principal contaminante na fase rica em micelas. Portanto, pode ser empregado como primeira etapa para a remoção de altas concentrações de LPS na purificação de proteínas hidrofílicas como a GFPuv
- Imprenta:
- Data da defesa: 20.08.2010
-
ABNT
LOPES, André Moreni. Remoção de endotoxina presente em meio fermentado contendo biomoléculas utilizando sistemas micelares de duas fases aquosas. 2010. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2010. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9135/tde-21012011-164951/. Acesso em: 24 set. 2024. -
APA
Lopes, A. M. (2010). Remoção de endotoxina presente em meio fermentado contendo biomoléculas utilizando sistemas micelares de duas fases aquosas (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9135/tde-21012011-164951/ -
NLM
Lopes AM. Remoção de endotoxina presente em meio fermentado contendo biomoléculas utilizando sistemas micelares de duas fases aquosas [Internet]. 2010 ;[citado 2024 set. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9135/tde-21012011-164951/ -
Vancouver
Lopes AM. Remoção de endotoxina presente em meio fermentado contendo biomoléculas utilizando sistemas micelares de duas fases aquosas [Internet]. 2010 ;[citado 2024 set. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9135/tde-21012011-164951/ - Influence of Choline Chloride on the Phase Equilibria and Partition Performance of Polymer/Polymer Aqueous Biphasic Systems
- Bacterial Cellulose Membranes as Carriers for Nisin: Incorporation, Antimicrobial Activity, Cytotoxicity and Morphology
- Spondias sp: Shedding Light on Its Vast Pharmaceutical Potential
- Co-Encapsulation of Drugs for Topical Application-A Review
- Reusing wastewater from processing to produce single-cell protein using : Optimizing of culture conditions
- Análise química e biológica do extrato bruto de Fridericia chica L. e co-encapsulação com tocotrienol 70% utilizando PEG-PCL
- Purificação da enzima glicose-6-fosfato desidrogenase por sistemas micelares de duas fases aquosas contendo ligantes de afinidade
- Radiolabeled Human Serum Albumin Nanoparticles Co-Loaded with Methotrexate and Decorated with Trastuzumab for Breast Cancer Diagnosis
- Effects of cholinium‐based ionic liquids on <i>Aspergillus niger</i> lipase: Stabilizers or inhibitors
- Selection and Control of Process Conditions Enable the Preparation of Curcumin-Loaded Poly(lactic-co-glycolic acid) Nanoparticles of Superior Performance
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
