Geração e imunocaracterização de anticorpos recombinantes humanos aplicáveis a terapia e diagnóstico de adenocarcinomas e distroglicanopatias (2022)
- Authors:
- Autor USP: LÉO, THAÍS CANASSA DE - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 604
- DOI: 10.11606/T.60.2022.tde-14042025-081237
- Subjects: ADENOCARCINOMA; ANTICORPOS MONOCLONAIS; MODELAGEM MOLECULAR; DOENÇAS GENÉTICAS
- Keywords: Adenocarcinomas; Anticorpos monoclonais humanos; Distroglicanopatias; Dystroglycanopathies; Glicosilação; Glycosylation; Human monoclonal antibodies; Modelagem molecular; Molecular modeling
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Na última década, um número crescente de doenças vem sendo associadas a irregularidades nos processos de glicosilação, dentre elas os adenocarcinomas e as distroglicanopatias, semelhantemente caracterizadas pelo encurtamento das cadeias de O-glicanas associadas às suas glicoproteínas. Os adenocarcinomas são cânceres conhecidos pela superexpressão da Mucina Tumoral 1 (MUC1) hipoglicosilada, um relevante marcador clínico também associados a processos de malignidade. Vários estudos envolvendo a MUC1 já foram realizados e diferentes estratégias terapêuticas são aplicáveis, entretanto, o enfretamento destes cânceres ainda é um desafio clínico e científico. Já as distroglicanopatias são doenças musculares de amplo espectro clínico e desafiador diagnóstico, cuja O-glicosilação reduzida na proteína α-distroglicana (α-DG) impede a ancoragem do músculo da membrana basal. Ademais, os anticorpos comerciais disponíveis para a α-DG reconhecem o padrão saudável, sendo o diagnóstico impreciso. Assim, o objetivo deste trabalho foi produzir e imunocaracterizar novos anticorpos, como potenciais ferramentas teranósticas capazes de colaborar no enfretamento dos adenocarcinomas e distroglicanopatias. Previamente, sequências de anticorpos humanos recombinantes contra alvos sintéticos miméticos de MUC1 tumoral e α-DG hipoglicosiladas foram selecionadas, identificadas e clonadas. Neste trabalho, após diversos testes de expressão, os fragmentos de anticorposforam produzidos no formato scFv (single chain fragment variable) de maneira solúvel no citoplasma de E. coli SHuffle. Eles foram capazes de reconhecer seus alvos sintéticos, em ensaio de ELISA, e nativos, em extratos de células tumorais e distróficas, por Western Blot. Neste ensaio, os scFvs anti MUC1 e α-DG apresentaram reatividade tanto pelo antígeno saudável hiperglicosildado, quanto pelo antígeno relacionado a doença. Entretanto, em ensaio de imunofluorescência com o antígeno preservado em sua configuração terciária nativa e bioativa, o scFv anti MUC1 foi capaz de discriminar células tumorais daquelas não tumorais. Análises de biologia computacional indicaram que a presença da glicosilação favorece a interação do scFv anti MUC1 com a porção peptídica do alvo tumoral, enquanto o scFv anti α-DG se liga ao alvo molecular de maneira carboidrato dependente. Ainda, o scFv anti MUC1 foi clonado em vetor bicistrônico pBudCE4.1 sob a forma de uma IgG humana para produção em lotes maiores e mais estáveis, utilizando sistema de células HEK293T e foi iniciado o desenvolvimento de um modelo de imunolipossoma, como futura proposta de uma aplicação desta nova IgG. Finalmente, neste trabalho foi possível produzir e imunocaracterizar a imunoreatividade e epítopo de reconhecimento dos scFvs anti MUC1 e α-DG, potenciais ferramentas teranósticas aplicáveis a adenocarcinomas e distroglicanopatias.
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- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2022
- Data da defesa: 31.08.2022
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- Cor do Acesso Aberto: gold
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ABNT
LEO, Thais Canassa de. Geração e imunocaracterização de anticorpos recombinantes humanos aplicáveis a terapia e diagnóstico de adenocarcinomas e distroglicanopatias. 2022. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2022. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60141/tde-14042025-081237/. Acesso em: 29 dez. 2025. -
APA
Leo, T. C. de. (2022). Geração e imunocaracterização de anticorpos recombinantes humanos aplicáveis a terapia e diagnóstico de adenocarcinomas e distroglicanopatias (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60141/tde-14042025-081237/ -
NLM
Leo TC de. Geração e imunocaracterização de anticorpos recombinantes humanos aplicáveis a terapia e diagnóstico de adenocarcinomas e distroglicanopatias [Internet]. 2022 ;[citado 2025 dez. 29 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60141/tde-14042025-081237/ -
Vancouver
Leo TC de. Geração e imunocaracterização de anticorpos recombinantes humanos aplicáveis a terapia e diagnóstico de adenocarcinomas e distroglicanopatias [Internet]. 2022 ;[citado 2025 dez. 29 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60141/tde-14042025-081237/ - Seleção, caracterização parcial e produção de fragmentos de anticorpos recombinantes humanos anti-glicopeptídeos miméticos de mucinas tumorais e a-distroglicana, por Phage Display
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Informações sobre o DOI: 10.11606/T.60.2022.tde-14042025-081237 (Fonte: oaDOI API)
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