Fosfatase alcalina reconstituída em "Lipid Rafts" (2010)
- Authors:
- Autor USP: CORREIA, MAYTÊ BOLEAN - FFCLRP
- Unidade: FFCLRP
- Sigla do Departamento: 593
- Subjects: LIPOSSOMOS; BIOFÍSICA; BIOQUÍMICA
- Keywords: DSC; Fosfatase alcalina; Lipid rafts; Lipossomo; Proteolipossomo; Alkaline phosphatase; Liposome; Proteoliposome
- Language: Português
- Abstract: A organização da membrana biológica em microdominios tem um papel chave em vários processos celulares semelhante a receptores protéicos e a transdução de sinal. A existência de microdomínios, também denominados de "rafts" tem sido explicada pela separação das membranas lipídicas em duas fases: liquida cristalina (L’alfa’) e fase liquida ordenada (Lo) rica em colesterol e esfingolipídeos. Assim, o enfoque deste projeto foi correlacionar mecanismos de controle da atividade da fosfatase alcalina (TNAP) com a organização intermolecular e o estado de fase de alguns lipídios que compõem as vesículas da matrix. Foi estudada a modulação da atividade da enzima e sua inserção à sistemas de lipossomos constituídos com diferentes composições lipídicas (Dipalmitoilfosfatidilcolina, Colesterol, Esfingomielina e Gangliosídeo) como um mecanismo de regulação e transdução entre enzimas que não compartilham intermediários metabólicos comuns. Isto é, verificar como mudanças de organização molecular, induzida por colesterol e/ou outros lipídios, podem modular a atividade de enzimas regulando a produção de mensageiros lipídicos secundários e/ou processos de fusão e recombinação topológica da bicamada lipídica, modulando concomitantemente a atividade da fosfatase alcalina. Com tal propósito, a TNAP foi reconstituída em lipossomos constituídos de DPPC e lipossomos mistos formando sistemas binários DPPC:Chol, DPPC:SM e DPPC:GM1 com razões malares de (9:1 ); sistemas terciários DPPC:Chol:SM, DPPC:Chol:GM1 e DPPC:SM:GM1 com razões malares de (8:1:1) e por fim sistemas quaternários constituídos de DPPC:Chol:SM:GM1 (7:1:1:1). Estes sistemas foram propostas com o intuito de mimetizarmos os elipid raftsf existentes nas membranas biológicas, porém utilizando lipídios que já foram identificados e quantificados nas vesículas da matrix. Foram avaliados os efeitos dacomposição lipídica dos lipossomos na inserção da enzima aos sistemas vesiculares. Além disso, foram realizados estudos biofísicos de calorimetria analisando como os parâmetros termodinâmicos são afetados com as diferentes composições lipídicas e pela presença da enzima ancorada aos sistemas. A reconstituição da enzima a lipossomos constituídos de DPPC proporcionou uma incorporação em torno de 80% da atividade enzimática. Estudos termodinâmicos dos proteolipossomos formados evidenciaram uma queda significativa nos valores de ‘delta’H em relação aos sistemas de lipossomos (de 7,63 a ‘1,88 kcal.mol POT. -1'). Lipossomos binários constituídos de DPPC:Chol em concentrações crescentes (9:1, 9:2, 9:3, 7:3, 9:4 e 9:5 razão malar) foram estudados tanto pelos parâmetros biofísicos como pela habilidade de inserção da enzima a tais sistemas. Foi observado um significativo decréscimo nos valores de variação entalpia com o aumento da proporção de colesterol no lipossomo. Além disso, a presença do colesterol proporcionou uma redução na inserção da atividade catalítica em até 42%, quando utilizada a composição lipídica de 9:5 DPPC:Chol.Dos sistemas binários formados com razões malares 9:1, o que apresentou maior porcentagem de reconstituição da TNAP foi o sistemas DPPC:Chol, apresentando em torno de 62% de incorporação da enzima. Os sistemas terciários apresentaram ao redor de 30% de incorporação da atividade catalítica e o sistema quaternário em torno de 25%. Além dos ensaios de atividade enzimática, a incorporação da enzima aos sistemas vesiculares também pôde ser comprovada pelas mudanças nos parâmetros termodinâmicas detectados por DSC. Nos estudos de calorimetria de todos os sistemas de proteolipossomos formados, foram observadas significativas diminuições nos valores de variação de entalpia quando comparados aos sistemas de lipossomoscorrespondentes. Deste modo, os resultados aqui apresentados fornecem novas informações que poderão contribuir tanto para a compreensão do comportamento da atividade da fosfatase alcalina na presença de diferentes composições lipídicas dos microdominios existente membrana, quanto para o entendimento dos processos de regulação da enzima durante o processo de biomineralização
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2010
- Data da defesa: 11.03.2010
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ABNT
BOLEAN, Maitê. Fosfatase alcalina reconstituída em "Lipid Rafts". 2010. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2010. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-18062010-115527/. Acesso em: 26 jun. 2024. -
APA
Bolean, M. (2010). Fosfatase alcalina reconstituída em "Lipid Rafts" (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-18062010-115527/ -
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Bolean M. Fosfatase alcalina reconstituída em "Lipid Rafts" [Internet]. 2010 ;[citado 2024 jun. 26 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-18062010-115527/ -
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Bolean M. Fosfatase alcalina reconstituída em "Lipid Rafts" [Internet]. 2010 ;[citado 2024 jun. 26 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-18062010-115527/ - Reconstituição da Anexina V em sistemas de lipossomos: associação com a fosfatase alcalina e correlação com estudos de biomineralização
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