Clonagem, expressão e caracterização do fator inibitório da migração dos macrófagos (MIF) de Leishmania major (2009)
- Authors:
- Autor USP: MOMO, PATRICIA BETONI - FFCLRP
- Unidade: FFCLRP
- Sigla do Departamento: 593
- Subjects: LEISHMANIOSE CUTÂNEA; PROTEÍNAS; MACRÓFAGOS
- Language: Português
- Abstract: O Fator Inibitório da Migração de Macrófagos (MIF), uma citocina pró-inflamatória, foi identificado primeiramente em mamíferos como produto de células T ativadas, e subseqüentemente, teve diversas funções biológicas descritas. A presença de ortólogos do MIF foi verificada em diversas espécies patogênicas ao homem, sendo sugerida a produção desses ortólogos, por parasitas, com função de modular a resposta imune, promovendo a sobrevivência dos parasitas no hospedeiro. Na seqüência do genoma de Leishmania major foram identificadas duas seqüências ortólogas do MIF, denominadas Lml740MIF e Lm1750MIF. As funções sugeridas para os ortólogos do MIF descritos em parasitas indicam que a caracterização estrutural e funcional da proteína MIF em L. major pode contribuir para o entendimento das funções dessa proteína na relação parasita/hopedeiro. Assim, neste trabalho, o gene Lm1750MIF foi amplificado do genoma e clonado em vetor de expressão pET21b. A proteína recombinante (rLm1750MIF) foi expressa na forma solúvel em E. coli, purificada por cromatografia de afinidade e detectada, por filtração em gel, como dímero em solução. A rLm1750MIF apresentou Vmáx de 26,47 '+OU-' 1,32 'MU'mol. 'min POT.-l'. 'mg POT.-l' e 'K IND.0,5' de 1,437 '+ OU -' 0,072 mmol.'L POT.-1' para o substrato fenilpiruvato, comprovando a atividade tautomerásica da proteína recombinante. Os espectros de dicroísmo circular dessa proteína, em função do pH, mostraram que a estrutura secundáriafoi mantida em pH 3,0 em conjunto com uma desorganização da estrutura terciária, indicando a presença de um estado intermediário glóbulo fundido da proteína. Ainda, os espectros de fluorescência intrínseca do triptofano e de fluorescência do ANS, confirmaram a formação do estado intermediário quando a proteína foi submetida à diminuição do pH. Por fim, no ensaio de migração celular foi verificada a atividade funcional de inibição da migração de macrófagos da proteína rLm1750MIF, confirmando a expressão e purificação da MIF recombinante de L. major funcionalmente ativa
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2009
- Data da defesa: 08.06.2009
-
ABNT
MOMO, Patrícia Betoni. Clonagem, expressão e caracterização do fator inibitório da migração dos macrófagos (MIF) de Leishmania major. 2009. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009. . Acesso em: 01 jan. 2026. -
APA
Momo, P. B. (2009). Clonagem, expressão e caracterização do fator inibitório da migração dos macrófagos (MIF) de Leishmania major (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Momo PB. Clonagem, expressão e caracterização do fator inibitório da migração dos macrófagos (MIF) de Leishmania major. 2009 ;[citado 2026 jan. 01 ] -
Vancouver
Momo PB. Clonagem, expressão e caracterização do fator inibitório da migração dos macrófagos (MIF) de Leishmania major. 2009 ;[citado 2026 jan. 01 ]
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
