Otimização da expressão e purificação da subunidade B da toxina STX2 de Escherichia coli enterohemorrágica em linhagens recombinantes de Escherichia coli (2008)
- Authors:
- Autor USP: FERREIRA, RITA DE CASSIA CAFE - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: MICROBIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Objetivo: A purificação da toxina Stx2, particularmente a subunidade B, representa ferramenta importante para o desenvolvimento de estratégias vacinais e métodos de diagnóstico da SHU. Nesse estudo avaliamos a expressão da subunidade B da toxina Stx2 em linhagens recombinantes de E. coli submetidas a diferentes condições de indução e sua posterior purificação por cromatografia de afinidade. Métodos e Resultados: A seqüência responsável pela síntese da subunidade B e mais os 31 aminoácidos finais do fragmento A2 foi clonada no vetor pET22b. O plasmídeo resultante foi introduzido em oito linhagens de E. coli que foram submetidas a dois protocolos de indução baseados na adição de IPTG ou lactose. Os resultados encontrados revelam que apenas duas linhagens [BL21(DE3)pLysS e BL21SI] foram capazes de expressar a proteína após adição de IPTG mas todas as linhagens testadas expressaram a proteína após cultivo na presença de lactose. Em condições ótimas de indução, a proteína recombinante mostrou-se solúvel e atingiu um máximo 5% da proteína celular total, independente do indutor utilizado. Após purificação por cromatografia de afinidade em resina contendo níquel foi possível obter valores máximos de 17 mg por litro em culturas induzidas com IPTG e lactose. Por fim, camundongos imunizados com a proteína recombinante foram capazes de gerar anticorpos específicos capazes de reconhecer em imunoblot a proteína nativa expressa por linhagens de EHEC. Conclusão: Adisponibilidade da proteína StxB2 recombinante abre perspectivas para o desenvolvimento de novas estratégias profiláticas e terapêuticas voltadas para o controle da SHU em humanos.
- Imprenta:
- Publisher: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP
- Publisher place: São Paulo
- Date published: 2008
- Source:
- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Congresso do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo
-
ABNT
GOMES, P. A. D. P. e BENTANCOR, L. V. e FERREIRA, Rita de Cássia Café. Otimização da expressão e purificação da subunidade B da toxina STX2 de Escherichia coli enterohemorrágica em linhagens recombinantes de Escherichia coli. 2008, Anais.. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2008. . Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Gomes, P. A. D. P., Bentancor, L. V., & Ferreira, R. de C. C. (2008). Otimização da expressão e purificação da subunidade B da toxina STX2 de Escherichia coli enterohemorrágica em linhagens recombinantes de Escherichia coli. In Resumos. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP. -
NLM
Gomes PADP, Bentancor LV, Ferreira R de CC. Otimização da expressão e purificação da subunidade B da toxina STX2 de Escherichia coli enterohemorrágica em linhagens recombinantes de Escherichia coli. Resumos. 2008 ;[citado 2024 abr. 23 ] -
Vancouver
Gomes PADP, Bentancor LV, Ferreira R de CC. Otimização da expressão e purificação da subunidade B da toxina STX2 de Escherichia coli enterohemorrágica em linhagens recombinantes de Escherichia coli. Resumos. 2008 ;[citado 2024 abr. 23 ] - In silico analysis of polyamine uptake system and molecular cloning of potD of Streptococcus mutans
- Glutamate transport and xanthan gum production in the plant pathogen Xanthomonas axonopodis pv. citri
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