Desenvolvimento de uma nova linhagem, denominada LEY79SF para produção de adenovirus livre de RCA (2007)
- Authors:
- Autor USP: STRAUSS, EUGENIA COSTANZI - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: HISTOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Objetivo: Produção de adenovírus (Ad) é uma etapa estratégica e de inovação biomédica, incluindo a produção de vacinas e protocolos de terapia gênica. A produção de Ad utiliza linhagens empacotadoras que oferecem o gene E1A em trans, como é o caso da linhagem helper HEK293. A presença de Ad com competência para replicar (RCA, replication-competent adenovirus) nas preparações é um dos maiores problemas para a produção de Ad em larga escala. RCAs são gerados pela recombinação entre seqüência do vetor e seqüência homologa do gene E1A da célula helper. A produção de Ad sofreu um grande impacto após a liberação para uso da linhagem Per.C6R. Esta linhagem é caracterizada por deleção no gene E1A que reduz a produção de RCAs. Todavia, as células Per.C6R são marca registrada, seu uso é restrito e requer cara licença. Nosso objetivo é desenvolver uma nova linhagem auxiliar (helper) para produção de Ad livres de RCA, denominada LEY79 (LTR E1A Y79)SF. Métodos e Resultados: As células LEY79, como a PerC6R, derivam de retina humana e crescem em suspensão. A seqüência E1A-E1B (nucleotídeos 429-3510) do Ad5 com a mesma deleção presente nas células PerC6R foi gerada a partir de DNA genômico das células 293A utilizando os primers de PCR: Ea1 - 5' CGTGTAGTGTATTTATTTACCCG-3' e Eb2-5'- CCCCTCGAGCTCAATCTGTATCTT 3'. O produto de PCR E1A/E1B foi inserido no sítio de XhoI do vetor retroviral pCLXSN. Células Y79 foram infectadas com o retrovírus pCLE1A/E1BSN e selecionadas com G418 e os clonesresistentes isolados. ) A eficiência de produção de AdeGFP na linhagem LEY79 está sendo comparada com a das linhagens HEK293A e HEK293H, utilizadas nos protocolos de produção de Ad. Em paralelo, as células LEY79 estão sendo adaptadas para crescimento em meio livre de soro. O regime de adaptação é o mesmo da Per.C6R, reduzindo o suplemento de soro de 10% até 0,001%, na presença do meio HYQCDM4RETINO (Hyclone), células adaptadas receberão a denominação LEY79SF. A linhagem produtora LEY79SF incorpora todas as características para ser uma boa produtora de Ad como a PerC6R: possui E1A com deleção que inibe a formação de RCA, crescimento em suspensão e em meio livre de soro, ideal para produção em bioreatores. Mas trata-se da primeira linhagem empacotadora de Ad com inativação mutacional (não viral) das proteínas supressoras de tumor pRb e p53, assim todo E1A e E1B produzidos serão direcionados para a produção de Ad e não para imortalização celular.Conclusões: Esperamos com a linhagem LEY79SF inovar no campo de processos para a produção de Ad recombinante.
- Imprenta:
- Publisher: Federação de Sociedades de Biologia Experimental
- Publisher place: Águas de Lindóia
- Date published: 2007
- Source:
- Título do periódico: Programa e Resumos
- Conference titles: Reunião Anual da Federação de Sociedades de Biologia Experimental - FESBE
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ABNT
DUARTE, P. et al. Desenvolvimento de uma nova linhagem, denominada LEY79SF para produção de adenovirus livre de RCA. 2007, Anais.. Águas de Lindóia: Federação de Sociedades de Biologia Experimental, 2007. . Acesso em: 19 set. 2024. -
APA
Duarte, P., Gregório, J. C., Strauss, B. E., & Costanzi-Strauss, E. (2007). Desenvolvimento de uma nova linhagem, denominada LEY79SF para produção de adenovirus livre de RCA. In Programa e Resumos. Águas de Lindóia: Federação de Sociedades de Biologia Experimental. -
NLM
Duarte P, Gregório JC, Strauss BE, Costanzi-Strauss E. Desenvolvimento de uma nova linhagem, denominada LEY79SF para produção de adenovirus livre de RCA. Programa e Resumos. 2007 ;[citado 2024 set. 19 ] -
Vancouver
Duarte P, Gregório JC, Strauss BE, Costanzi-Strauss E. Desenvolvimento de uma nova linhagem, denominada LEY79SF para produção de adenovirus livre de RCA. Programa e Resumos. 2007 ;[citado 2024 set. 19 ] - Construção de uma nova plataforma de vetores retrovirais contendo EGFP como marcador molecular
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