Efeitos de deleções internas sobre a estrutura e propriedades funcionais da tropomiosina (2002)
- Authors:
- Autor USP: LATARO, RENATA CRISTINA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBI
- Assunto: BIOQUÍMICA
- Language: Português
- Abstract: Tropomiosina ( Tmy) é uma proteína com estrutura "coiled coil" paralela que se liga ao longo do comprimento do filamento de actina nas longas fendas da hélice. A sequência contam padrões periódicos de aminoácidos que relacionam à sua estrutura e função. O heptapeptídeo repetitivo de aminoácidos é fundamental para a formação da interface estável entre as cadeias em 'alfa'-hélice, que permitem a formação de um "coiled coil". Análise da seqüência da 'alfa'-Tmy estriada revelou um segundo padrão uma seqüência periódica de 7 repetições de aminoácidos pobremente conservada, que é suficientemente regular para representar sítios de ligação da actina. Para entender a importância funcional do comprimento e dos períodos internos foram produzidas por engenharia genética tropomiosinas encurtadas, deletando-se 5 e 3 períodos intemos de ligação da actina da ASTmy ( 27Tmy e 46Tmy). As tropomiosinas recombinantes foram expressas em E. colf a fim de se obter quantidades sufiicientes para a caracterização de sua função, e purificadas por precipitação alcoólica isoelétrica e fracionamento por sulfato de amânio, seguida de cromatografia de troca iônica. Após purificação as proteínas 27Tmy e 46Tmy foram utilizadas para a caracterização das propriedades físicas utilizando como parâmetro de comparação à proteina ASTmy. A atividade biológica das tropomiosinas recombinantes (27Tmy e 46Tmy) foi analisada através de 2 ensaios funcionais: ensaio de co-sedimentação com actina e troponina eensaio de polimerização cabeça-cauda. Os resultados obtidos mostram que nenhuma das tropomiosinas recombinantes produzidas foi capaz de se ligar à actina na presença ou não de troponina. Quanto capacidade de polimerização cabeça-cauda houve uma pequena desetabilização da 27Tmy enquanto que a 46Tmy não polimerizou apesar de ambas formarem 'alfa'-hélice na presença de 100 mM de NaCl. Com base netes resultados podemos concluir ) que a estabilidade da tropomiosina pode estar ligada à presença de resíduos em posições específicas
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2002
- Data da defesa: 01.02.2002
-
ABNT
LATARO, Renata Cristina. Efeitos de deleções internas sobre a estrutura e propriedades funcionais da tropomiosina. 2002. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2002. . Acesso em: 20 out. 2024. -
APA
Lataro, R. C. (2002). Efeitos de deleções internas sobre a estrutura e propriedades funcionais da tropomiosina (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Lataro RC. Efeitos de deleções internas sobre a estrutura e propriedades funcionais da tropomiosina. 2002 ;[citado 2024 out. 20 ] -
Vancouver
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