Purificação e caracterização das 'beta'-glicosidases digestivas de Spodoptera frugiperda (Lepidoptera) (1999)
- Authors:
- Autor USP: MARANA, SANDRO ROBERTO - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- Subjects: INSETOS; BIOQUÍMICA
- Language: Português
- Abstract: Foram purificados através de uma combinação de cromatografias as duas 'beta'-glicosidases digestivas (Mr 47.000 e 50.000 - denominadas bgli47 e bgli50, respectivamente) encontradas na larva de S. frugiperda. Experimentos de competição entre substratos e modificação química mostraram que a bgli47 possui dois sítios ativos. Um desses sítios denominado aril b-glicosidase apresenta um subsítio -1 que liga galactose mais eficientemente enquanto que o subsítio +1 prefere pequenos grupos hidrofóbicos cíclicos. O segundo sítio, denominado celobiase, possui um subsítio -1 que prefere glicose. Já a região de ligação do aglicone apresenta 4 subsítios, que ligam glicose com afinidade decrescente à medida que se afastam do ponto de clivagem do substrato. O cDNA que codifica a bgli50 foi clonado a seqüenciado. Alinhamentos de seqüência de aminoácidos, experimentos de competição entre substratos e inibição mostraram que esta enzima possui apenas um sítio ativo. O subsítio-1, cuja especificidade é controlada por uma rede de pontes de hidrogênio, foi estudado comparando-se os parâmetros cinéticos (Kcat e Kcat/Km) para a hidrólise de NPb glicosídeos. A região de posicionamento do aglicone, uma fenda hidrofóbica composta de 3 subsítios, foi caracterizada utilizando-se alquil b-glucosídeos e oligocelodextrinas como inibidores. O alinhamento da seqüência de aminoácidos da bgli50 com outras glicosil hidrolases sugeriu quais aminoácidos participaram da ligação do substrato eque o Glu187 (doador de protons - pka= 7,5) e o Glu399 (nucleófilo - pka = 4,5) estão diretamente envolvidos na catálise. Além disso, a Arg97 e a Tyr331 participaram indiretamente modulando o pKa do Glu399
- Imprenta:
- Data da defesa: 05.04.1999
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ABNT
MARANA, Sandro Roberto. Purificação e caracterização das 'beta'-glicosidases digestivas de Spodoptera frugiperda (Lepidoptera). 1999. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 1999. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-08082008-130612/. Acesso em: 16 abr. 2024. -
APA
Marana, S. R. (1999). Purificação e caracterização das 'beta'-glicosidases digestivas de Spodoptera frugiperda (Lepidoptera) (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-08082008-130612/ -
NLM
Marana SR. Purificação e caracterização das 'beta'-glicosidases digestivas de Spodoptera frugiperda (Lepidoptera) [Internet]. 1999 ;[citado 2024 abr. 16 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-08082008-130612/ -
Vancouver
Marana SR. Purificação e caracterização das 'beta'-glicosidases digestivas de Spodoptera frugiperda (Lepidoptera) [Internet]. 1999 ;[citado 2024 abr. 16 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-08082008-130612/ - Optimum temperature may be a misleading parameter in enzyme characterization and application
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