Espalhamento de raios-X a baixos ângulos no contexto da biologia estrutural: aplicação ao estudo de protenas chaperonas (2025)
- Authors:
- Autor USP: RODRIGUES, LUIZ FERNANDO DE CAMARGO - IF
- Unidade: IF
- Sigla do Departamento: FGE
- DOI: 10.11606/T.43.2025.tde-25032025-174219
- Subjects: BIOFÍSICA; ESPALHAMENTO DE RAIOS X A BAIXOS ÂNGULOS
- Keywords: BIOFÍSICA MOLECULAR; CHAPERONAS MOLECULARES; ENOVELAMENTO DE PROTEÍNAS; MOLECULAR BIOPHYSICS; MOLECULAR CHAPERONES; PROTEIN FOLDING; SAXS
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Espalhamento de Raios-X a Baixos Ângulos (SAXS) é uma técnica experimental que permite extrair informações de tamanho, massa e forma de partículas de uma amostra, e nas últimas décadas se tornou uma técnica importante dentro da biologia estrutural, especialmente para estudos de proteínas em solução. Chaperonas são uma classe de proteínas essencial para o metabolismo celular, centrais no sistema de controle de qualidade proteico (CQP), prevenindo problemas de enovelamento incorreto e agregação proteica, que estão associados a doenças ligadas ao envelhecimento, como diferentes tipos de câncer e doenças neurodegenerativas. No presente trabalho foram estudados quatro elementos do CQP, com especial foco em análises de SAXS: a desagregase Hsp101 de cana-de-açúcar (SsHsp101), a Hsp70 constitutiva humana (HSPA8), a co-chaperona SGT de \textit{Aedes aegypti} (AaSGT) e a interação da co-chaperona hHep1 com membranas biológicas. A SsHsp101 foi purificada e estudada em duas condições de força iônica. Em cada condição a SsHsp101 adotou estados oligoméricos distintos que, apesar de muito similares em conteúdo de estrutura secundária, mostraram diferenças sensíveis com relação a outros elementos estruturais e à atividade. Os hexâmeros se mostraram estruturalmente muito similares à Hsp104 de levedura, com conformação mais compacta, e apresentaram maior atividade ATPásica, enquanto dímeros apresentaram maior grau de mobilidade conformacional.A HSPA8 esteve presente como monômero e com conformação em linha com outras Hsp70 estudadas anteriormente. Nossas análises permitiram não apenas a obtenção do envelope da chaperona, mas também de indícios de que a HSPA8 foi encontrada com duas orientações principais entre os domínios NBD e SBD: uma aberta e outra fechada, sendo esta última mais frequente. A AaSGT foi encontrada como dímero de conformação geral notadamente aberta em que a região C-terminal de cada subunidade se orientando em sentidos opostos. Pôde ser verificada também a alta flexibilidade da região C-terminal, em linha com a predição de conteúdo de estrutura secundária. Por fim, a hHep1 esteve presente como oligômero em solução, interagindo superficialmente com lipossomos negativamente carregados, sem penetração na região hidrofóbica da membrana. Este trabalho ilustra a riqueza de informações que podem ser obtidas com SAXS para proteínas em solução. Em conjunto com outras técnicas biofísicas, SAXS permite não apenas a validação de resultados de outros experimentos, mas também avançar na elaboração de modelos mais complexos
- Imprenta:
- Data da defesa: 07.02.2025
- Status:
- Artigo publicado em periódico de acesso aberto (Gold Open Access)
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- Versão publicada (Published version)
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-
ABNT
RODRIGUES, Luiz Fernando de Camargo. Espalhamento de raios-X a baixos ângulos no contexto da biologia estrutural: aplicação ao estudo de protenas chaperonas. 2025. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2025. Disponível em: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/43/43134/tde-25032025-174219/. Acesso em: 01 abr. 2026. -
APA
Rodrigues, L. F. de C. (2025). Espalhamento de raios-X a baixos ângulos no contexto da biologia estrutural: aplicação ao estudo de protenas chaperonas (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://teses.usp.br/teses/disponiveis/43/43134/tde-25032025-174219/ -
NLM
Rodrigues LF de C. Espalhamento de raios-X a baixos ângulos no contexto da biologia estrutural: aplicação ao estudo de protenas chaperonas [Internet]. 2025 ;[citado 2026 abr. 01 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/43/43134/tde-25032025-174219/ -
Vancouver
Rodrigues LF de C. Espalhamento de raios-X a baixos ângulos no contexto da biologia estrutural: aplicação ao estudo de protenas chaperonas [Internet]. 2025 ;[citado 2026 abr. 01 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/43/43134/tde-25032025-174219/ - Determinação da estrutura e do estado oligomérico de proteínas chaperonas por espalhamento de raios-x a baixos ângulos (SAXS)
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