Caracterização da RanBP1 de Nicotiana tabacum e sua interação com NtCDKG;2 na putativa regulação do fuso mitótico (2019)
- Authors:
- Autor USP: THOMÉ, VANESSA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGE
- DOI: 10.11606/D.17.2019.tde-02082024-094153
- Subjects: EXPRESSÃO GÊNICA; SOLANACEAE; PROTEÍNAS; PAPAVERALES; GENÉTICA VEGETAL
- Keywords: BY-2 cells; Células BY-2; Expressão gênica; Fosforilação; Gene expression; Phosphorylation; Ran; SCI1
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Em Nicotiana tabacum, SCI1 (Stigma/style Cell-cycle Inhibitor 1) é expresso no meristema floral, estigma/estilete, e regula o tamanho final do pistilo através do controle da proliferação celular. Em busca de proteínas parceiras de interação com SCI1, identificou-se, entre outras proteínas, uma CDK (Cyclin-Dependent Kinase) homóloga à CDKG;2 da planta modelo Arabidopsis thaliana, que foi, então, denominada de NtCDKG;2. Para elucidar a localização de NtCDKG;2 durante o ciclo celular, foram analisadas células BY-2 expressando estavelmente GFP-NtCDKG;2, que foi encontrada junto ao fuso mitótico em metáfase e anáfase. Além disso, foi realizado um screening de uma biblioteca de cDNAs de estigma/estilete no sistema de duplo-híbrido de levedura (Yeast two-hybrid, Y2H) utilizando NtCDKG;2 como isca. Neste screening foram identificadas duas proteínas que atuam no âmbito dos microtúbulos: Ntβ-tubulina e NtRanBP1(Ran binding protein 1). Em conjunto, esses dados sugerem que NtCDKG;2 também pode estar atuando na organização do fuso mitótico em N. tabacum. Em outras espécies, RanBP1 atua na rede de proteínas ligadas à Ran, que durante a divisão celular atuam em diversos aspectos da mitose, como na polarização e estabilização do fuso mitótico e inibição da replicação do DNA. Esse sistema apresenta alta conservação nos eucariotos, entretanto pouco foi estudado sobre a RanBP1 em plantas e, em N. tabacum, nenhum estudo até então tinha sido realizado. Dessa forma, os principais objetivos desse trabalho foram: caracterizar a NtRanBP1, analisar a co-localização entre NtRanBP1 e NtCDKG;2 e testar a interação de NtCDKG;2 com NtRanBP1 e Ntβ-tubulina. Foi mostrado que NtRanBP1 apresenta o domínio de ligação à Ran, aminoácidos com alta probabilidade de serem fosforilados, e putativos sinais de localização e exclusão nuclear. Durante a intérfase, NtRanBP1 écitoplasmática e no início da divisão celular é encontrada no núcleo. No decorrer da divisão celular ela fica concentrada próximo à cromatina, sendo excluída do núcleo no final da divisão, quando o envoltório nuclear se estabelece. A co-localização entre NtRanBP1 e NtCDKG;2 ocorre no início da divisão celular, quando NtRanBP1 é encontrada no núcleo. A interação entre elas foi confirmada por Y2H, bem com a interação entre NtCDKG;2 e Ntβ-tubulina. Foram desenvolvidas plantas de N. benthamiana transgênicas expressando NtCDKG;2-GFP, como ferramenta para aprofundar esses estudos. Nas análises das expressões endógenas em células BY-2, o gene NtRanBP1 é expresso ao longo de todo o ciclo celular, com um pico de indução na transição G1/S, enquanto o gene SCI1 tem uma expressão aparentemente constante durante o ciclo celular. Os resultados encontrados sobre NtRanBP1 são semelhantes ao descrito para seus homólogos de outras espécies, sugerindo que a função de RanBP1 durante o ciclo celular também é conservada em espécies de Nicotiana. Além disso, a interação confirmada entre NtRanBP1 e Ntβ-tubulina com NtCDKG;2, e a co-localização entre NtCDKG;2 e NtRanBP1 durante o início da divisão celular, fortalecem a hipótese de que esta CDK atue na regulação do fuso mitótico
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2019
- Data da defesa: 28.03.2019
- Status:
- Artigo publicado em periódico de acesso aberto (Gold Open Access)
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- Versão publicada (Published version)
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ABNT
THOMÉ, Vanessa. Caracterização da RanBP1 de Nicotiana tabacum e sua interação com NtCDKG;2 na putativa regulação do fuso mitótico. 2019. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2019. Disponível em: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-02082024-094153/. Acesso em: 06 maio 2026. -
APA
Thomé, V. (2019). Caracterização da RanBP1 de Nicotiana tabacum e sua interação com NtCDKG;2 na putativa regulação do fuso mitótico (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-02082024-094153/ -
NLM
Thomé V. Caracterização da RanBP1 de Nicotiana tabacum e sua interação com NtCDKG;2 na putativa regulação do fuso mitótico [Internet]. 2019 ;[citado 2026 maio 06 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-02082024-094153/ -
Vancouver
Thomé V. Caracterização da RanBP1 de Nicotiana tabacum e sua interação com NtCDKG;2 na putativa regulação do fuso mitótico [Internet]. 2019 ;[citado 2026 maio 06 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-02082024-094153/ - Caracterização de SlSCI1 no desenvolvimento reprodutivo de Solanum lycopersicum e avanços sobre a função de RH35 em plantas
- Defecation reflex seizures: a case report with long-term VEEG monitoring, neuroimaging and comprehensive epilepsy evaluation
- Altered NTRH35 expression levels affect Nicotiana tabacum plant growth and the expression of cell cycle genes
- The Nicotiana tabacum CDKG;2 is involved in flowering, transcription, splicing and cell cycle control
- SCI1 is a direct target of AGAMOUS and WUSCHEL and is specifically expressed in the floral meristematic cells
- SCI1 expression in Nicotiana tabacum floral meristems is regulated by the transcription factors WUSCHEL, aintegumenta-like6 and agamous
- SCI1, a flower regulator of cell proliferation, and its partners NtCDKG2 and NtRH35 interact with the splicing machinery
- SCI1 (stigma/style cell-cycle inhibitor 1) and its interaction partner, NtDDX41, are new plant spliceosome-associated factors
- A novel plant DEAD-box RNA helicase associated with transcription factors
- Unveiling the movement of RanBP1 during the cell cycle and its interaction with a Cyclin-Dependent Kinase (CDK) in plants
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