Método LC-MS/2D utilizando biorreatores enzimáticos como pós-coluna para triagem <i>on-flow</i> de ligantes em extratos naturais (2022)
- Authors:
- Autor USP: PIRES, ANANDA FERREIRA - FFCLRP
- Unidade: FFCLRP
- Sigla do Departamento: 593
- DOI: 10.11606/D.59.2022.tde-06052022-103953
- Subjects: ENZIMAS; PRODUTOS NATURAIS; INIBIDORES DE ENZIMAS; CROMATOGRAFIA
- Keywords: Acetilcolinesterase; Acetylcholinesterase; Enzimas imobilizadas; Enzyme inhibitors; Extratos de produtos naturais; High-efficiency screening; Immobilized enzymes; Inibidores enzimáticos; Natural products extracts; Triagem de alta eficiência
- Language: Português
- Abstract: Extratos naturais são matrizes complexas, constituídos de várias substâncias com atividades biológicas diversas, dentre as quais algumas podem ser utilizadas como inibidores enzimáticos. Inibidores enzimáticos têm sido amplamente utilizados no tratamento de diversas doenças, como por exemplo a doença de Alzheimer (DA), que utiliza a inibição da enzima acetilcolinesterase (AChE) para o resgate da função colinérgica em portadores da DA. Os métodos clássicos de fracionamento bioguiado de extratos naturais envolvem alto consumo de tempo, e triagens off-line de extratos brutos não resultam em informações sobre os compostos individuais presentes no extrato. Como alternativa surge o acoplamento de técnicas de separação cromatográfica com os ensaios biológicos. Neste contexto, com a perspectiva de desenvolver um sistema eficiente de ensaios para triagem de ligantes, foi otimizado um sistema on-flow abrangente com duas dimensões (2D-LC/MS), sendo a primeira dimensão constituída de uma coluna cromatográfica de HPLC, e a segunda dimensão composta pelo biorreator, também chamado de cIMER (capillary immobilized enzyme reactor), para o ensaio de ligantes. A detecção dos compostos separados pela fase cromatográfica e a análise da capacidade inibitória das frações dos extratos é realizada por meio do monitoramento do produto da reação enzimática após ensaio biológico por meio de espectrometria de massas (MS). No presente trabalho, o sistema 2D-LC/MS foi aplicado, comprovando sua eficiência na análise da atividade inibitória para aenzima AChE de inibidores padrão e também do extrato bruto da espécie Hippeastrum calyptratum (Amaryllidaceae), sem purificações prévias. Foi possível identificar de modo on-flow qual fração do extrato apresentava atividade inibitória e então se aprofundar no estudo dessa fração, que indica que a inibição da AChE se dá pela presença do íon de m/z 266 e/ou m/z 360 encontrados no extrato, os quais ainda não foram completamente caracterizados, porém que resulta em uma imensa diminuição das possibilidades de compostos presentes nesse extrato responsáveis pela atividade inibitória detectada que, de outra forma, não seria capaz de se esmiuçar sem fracionamento e purificação prévias do extrato
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2022
- Data da defesa: 07.03.2022
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
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ABNT
PIRES, Ananda Ferreira. Método LC-MS/2D utilizando biorreatores enzimáticos como pós-coluna para triagem <i>on-flow</i> de ligantes em extratos naturais. 2022. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2022. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-06052022-103953/. Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Pires, A. F. (2022). Método LC-MS/2D utilizando biorreatores enzimáticos como pós-coluna para triagem <i>on-flow</i> de ligantes em extratos naturais (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-06052022-103953/ -
NLM
Pires AF. Método LC-MS/2D utilizando biorreatores enzimáticos como pós-coluna para triagem <i>on-flow</i> de ligantes em extratos naturais [Internet]. 2022 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-06052022-103953/ -
Vancouver
Pires AF. Método LC-MS/2D utilizando biorreatores enzimáticos como pós-coluna para triagem <i>on-flow</i> de ligantes em extratos naturais [Internet]. 2022 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-06052022-103953/ - Método LC-MS/2D utilizando biorreatores enzimáticos como pós-coluna para triagem <i>on-flow</i> de ligantes em extratos naturais
- A comprehensive 2D-LC/MS online platform for screening of acetylcholinesterase inhibitors
- Development of DNA polymer films as a drug delivery system for the treatment of oral cancer
- DNA polymer films used as drug delivery systems to early-stage diagnose and treatment of breast cancer using 3D tumor spheroids as a model
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.59.2022.tde-06052022-103953 (Fonte: oaDOI API)
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