Mutational and functional study of Tuberous Sclerosis Complex 1 and 2 genes (TSC1 and TSC2) (2019)
- Authors:
- Autor USP: ALMEIDA, LUIZ GUSTAVO DUFNER DE - IB
- Unidade: IB
- Sigla do Departamento: BIO
- Subjects: DOENÇAS GENÉTICAS; MUTAÇÃO GENÉTICA; GENES; CÓDIGO GENÉTICO
- Keywords: Complexo da esclerose tuberosa; Estudo funcional; Functional study; Gene TSC1; Gene TSC2; Transcriptoma; Transcriptome; TSC1 gene; TSC2 gene; Tuberous Sclerosis Complex
- Agências de fomento:
- Language: Inglês
- Abstract: O complexo de esclerose tuberosa (TSC) é um distúrbio autossômico dominante causado por variantes patogênicas em um de dois genes supressores de tumor TSC1 ou TSC2. Afeta mais frequentemente o cérebro, a pele, os rins, o coração, os pulmões e a retina. Os produtos proteicos de ambos os genes, TSC1 (hamartina) e TSC2 (tuberina), interagem formando um complexo que inibe o mTORC1. As células com inactivação bi- alélica dos genes TSC1 ou TSC2 apresentam hiperactivação de mTORC1, que fosforila alvos a jusante, regulando positivamente a proliferação e o crescimento celular. Além disso, o papel funcional da co-chaperona da proteína de choque térmico (HSP) foi atribuído à proteína TSC1. O primeiro objetivo dessa tese foi analisar a natureza, distribuição e os efeitos funcionais das variantes de DNA de TSC1 e TSC2 de 100 pacientes com diagnóstico clínico definitivo de TSC. Analisamos o DNA de leucócitos de 115 pacientes com TSC de três hospitais brasileiros de referência. Variantes de DNA patogênico foram detectadas em 99 (86,09%) indivíduos não relacionados; 17 (17,17%) em TSC1 e 82 (82,82%) em TSC2. Mutações de perda de função foram detectadas em 87 pacientes, dos quais as variantes frameshift (29,29%) e nonsense (29,29%) foram os tipos mais comuns. Deleções in-frame, variantes missense e variantes de splicing com significância clínica incerta (VUS) foram avaliadas funcionalmente. Cinco variantes aumentaram significativamente a fosforilação do resíduo repórter S6K Thr 389 .Quarenta e uma novas variantes de DNA patogênico e 19 novas variantes de nucleotídeo único foram detectadas. Entre os 11 indivíduos sem mutação identificada, sete apresentaram variantes raras missense, splicing ou deleções in-frame do tipo VUS. Para entender a relação regulatória da expressão do gene TSC1/2, tivemos com segundo objetivo avaliar os níveis de mRNA e proteína de TSC1 e TSC2 em linhagens de células humanas com inativação bi-alélica de cada gene. Empregamos uma análise de transcriptoma de alto rendimento (RNA-Seq) e Western blotting de HEK293T e outras seis linhagens celulares derivadas de HEK293T que possuíam a sequência genomica dos genes TSC1 e/ou TSC2 editados por CRISPR- CAS9. Na falta da proteína TSC1 ou TSC2, foi observada uma redução significativa do respectivo mRNA, inferindo ausência de feedback transcricional positivo. Linhagens celulares privadas de soro TSC1 -/- diminuíram os níveis de mRNA de TSC2. Sob estas condições, os níveis de mRNA de TSC1 não foram afetados negativamente pela falta de TSC2. Numa linhagem celular com a perda de TSC1 (1C2), os RNAm de TSC1/2 e os níveis de proteína de TSC2 foram consistentemente diminuídos independentemente no soro. Análise de RNA-Seq comparando a linhagens celular de 1C2 com a referência HEK293T revelou uma regulação negativa de vias de tradução independentemente no soro; e supra-regulação das vias de enrolamento e estabilidade das proteínas após a retirada do soro. Nossos dados são consistentes com o papel doTSC1 como co-chaperona de HSP, e sugerem que o mRNA de TSC1 pode ser regulador nos níveis de transcrição
- Imprenta:
- Data da defesa: 18.06.2019
-
ABNT
ALMEIDA, Luiz Gustavo Dufner de. Mutational and functional study of Tuberous Sclerosis Complex 1 and 2 genes (TSC1 and TSC2). 2019. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2019. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41131/tde-27082019-100610/. Acesso em: 04 ago. 2025. -
APA
Almeida, L. G. D. de. (2019). Mutational and functional study of Tuberous Sclerosis Complex 1 and 2 genes (TSC1 and TSC2) (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41131/tde-27082019-100610/ -
NLM
Almeida LGD de. Mutational and functional study of Tuberous Sclerosis Complex 1 and 2 genes (TSC1 and TSC2) [Internet]. 2019 ;[citado 2025 ago. 04 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41131/tde-27082019-100610/ -
Vancouver
Almeida LGD de. Mutational and functional study of Tuberous Sclerosis Complex 1 and 2 genes (TSC1 and TSC2) [Internet]. 2019 ;[citado 2025 ago. 04 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41131/tde-27082019-100610/
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
