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As vias de p53/ARF e interferon beta como alvos de terapia gênica de carcinoma colorretal (2018)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: DEL VALLE, PAULO ROBERTO - FM
  • Unidades: FM
  • Sigla do Departamento: MDR
  • Subjects: NEOPLASIAS COLORRETAIS; TERAPÊUTICA MÉDICA; ADENOVÍRUS; IMUNOTERAPIA; GENES REGULADORES; INTERFERONS; CÉLULAS DENDRÍTICAS; GENES
  • Keywords: Adenovírus humano; Adenoviruses human; Colorectal neoplasm; Dendritic cells; Gene therapy; Genes p53; Immunotherapy; Interferon beta; Terapia gênica
  • Language: Português
  • Abstract: O câncer colorretal é o terceiro em mortalidade, e apesar das classificações moleculares, entre 30% e 40% dos pacientes apresentam recidiva após quimioterapia, o que aponta a necessidade de novas estratégias terapêuticas. É crescente o estudo de vetores virais para a terapia gênica do câncer, e dados do nosso laboratório mostraram que a entrega combinada dos genes Arf (supressor tumoral e parceiro funcional de p53) e interferon-beta (IFNbeta, citocina imunomodulatória), via vetores adenovirais sob o controle do promotor responsivo à p53 causou indução de morte celular massiva e um efeito imunomodulatório importante. Entretanto, esses resultados foram observados em modelos murinos. O presente trabalho avalia como a combinação da modulação das vias de p53 e IFNbeta impacta células de carcinoma colorretal humano em ensaios in vitro. Para isto, utilizamos nosso adenovírus para transferir p53 (p53) e IFNbeta como uma estratégia combinada para induzir a morte celular na presença de um modulador imunológico. As linhas celulares HCT116, HCT116p53-/- toleraram uma MOI (multiplicidade de infecção) de 25, enquanto uma MOI de 100 foi suportada por HT29 (mutante p53 R273H). O promotor PG, dependente de p53, como esperado, proporcionou níveis de expressão de GFP reduzidos em HCT116 p53 -/- e HT29, mas a expressão foi aumentada em todas as linhas celulares quando co-transduzida com o vetor codificando p53, mas não com IFNbeta. Em geral, HCT116 e HCT116p53-/- foram mais sensíveis àtransferência de p53, enquanto o HT29 foi particularmente afetado pela combinação de p53 + IFNbeta. Esta tendência reflectiu-se na viabilidade celular (curva de crescimento, MTT), formação de colónias e acumulação de células hipodiplóides. Os níveis de morte celular correlacionaram-se com a atividade da caspase 3/7 e coloração com o Anexina V. Os marcadores de morte imunogênico ATP e calreticulina também foram aumentados, especialmente para o HT29 tratado com INFbeta sozinho ou em combinação com p53. Além disso, observamos aumento da expressão de TP63, TP73, bem como alvos transcricionais de p53, como p21 e NOXA, enquanto SESTRIN foi reduzido em ambas as linhagens HCT, mas aumentou em HT29. Adicionalmente, testamos a combinação p53 + IFNbeta em associação com quimioterápicos, revelando cooperação entre a transferência gênica e a doxorrubicina ou 5-FU, mesmo nas menores doses testadas. Ensaios em andamento incluem a avaliacao da ativacao de celulas dentriticas humanas expostas para as celulas tumorais tratadas com os vetores portadores de p53 e/ou IFNbeta. Com este projeto, nossa abordagem de transferência gênica revelará a resposta aos transgenes em modelo humano e também abrirá o caminho para estudar o envolvimento do sistema imune humano
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 26.10.2018
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    • ABNT

      DEL VALLE, Paulo Roberto; STRAUSS, Bryan Eric. As vias de p53/ARF e interferon beta como alvos de terapia gênica de carcinoma colorretal. 2018.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2018. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-14012019-150409/ >.
    • APA

      Del Valle, P. R., & Strauss, B. E. (2018). As vias de p53/ARF e interferon beta como alvos de terapia gênica de carcinoma colorretal. Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-14012019-150409/
    • NLM

      Del Valle PR, Strauss BE. As vias de p53/ARF e interferon beta como alvos de terapia gênica de carcinoma colorretal [Internet]. 2018 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-14012019-150409/
    • Vancouver

      Del Valle PR, Strauss BE. As vias de p53/ARF e interferon beta como alvos de terapia gênica de carcinoma colorretal [Internet]. 2018 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-14012019-150409/


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