As vias de p53/ARF e interferon beta como alvos de terapia gênica de carcinoma colorretal (2018)
- Authors:
- Autor USP: DEL VALLE, PAULO ROBERTO - FM
- Unidade: FM
- Sigla do Departamento: MDR
- DOI: 10.11606/T.5.2019.tde-14012019-150409
- Subjects: NEOPLASIAS COLORRETAIS; TERAPÊUTICA MÉDICA; ADENOVÍRUS; IMUNOTERAPIA; GENES REGULADORES; INTERFERONS; CÉLULAS DENDRÍTICAS; GENES
- Keywords: Adenovírus humano; Adenoviruses human; Colorectal neoplasm; Dendritic cells; Gene therapy; Genes p53; Immunotherapy; Interferon beta; Terapia gênica
- Language: Português
- Abstract: O câncer colorretal é o terceiro em mortalidade, e apesar das classificações moleculares, entre 30% e 40% dos pacientes apresentam recidiva após quimioterapia, o que aponta a necessidade de novas estratégias terapêuticas. É crescente o estudo de vetores virais para a terapia gênica do câncer, e dados do nosso laboratório mostraram que a entrega combinada dos genes Arf (supressor tumoral e parceiro funcional de p53) e interferon-beta (IFNbeta, citocina imunomodulatória), via vetores adenovirais sob o controle do promotor responsivo à p53 causou indução de morte celular massiva e um efeito imunomodulatório importante. Entretanto, esses resultados foram observados em modelos murinos. O presente trabalho avalia como a combinação da modulação das vias de p53 e IFNbeta impacta células de carcinoma colorretal humano em ensaios in vitro. Para isto, utilizamos nosso adenovírus para transferir p53 (p53) e IFNbeta como uma estratégia combinada para induzir a morte celular na presença de um modulador imunológico. As linhas celulares HCT116, HCT116p53-/- toleraram uma MOI (multiplicidade de infecção) de 25, enquanto uma MOI de 100 foi suportada por HT29 (mutante p53 R273H). O promotor PG, dependente de p53, como esperado, proporcionou níveis de expressão de GFP reduzidos em HCT116 p53 -/- e HT29, mas a expressão foi aumentada em todas as linhas celulares quando co-transduzida com o vetor codificando p53, mas não com IFNbeta. Em geral, HCT116 e HCT116p53-/- foram mais sensíveis àtransferência de p53, enquanto o HT29 foi particularmente afetado pela combinação de p53 + IFNbeta. Esta tendência reflectiu-se na viabilidade celular (curva de crescimento, MTT), formação de colónias e acumulação de células hipodiplóides. Os níveis de morte celular correlacionaram-se com a atividade da caspase 3/7 e coloração com o Anexina V. Os marcadores de morte imunogênico ATP e calreticulina também foram aumentados, especialmente para o HT29 tratado com INFbeta sozinho ou em combinação com p53. Além disso, observamos aumento da expressão de TP63, TP73, bem como alvos transcricionais de p53, como p21 e NOXA, enquanto SESTRIN foi reduzido em ambas as linhagens HCT, mas aumentou em HT29. Adicionalmente, testamos a combinação p53 + IFNbeta em associação com quimioterápicos, revelando cooperação entre a transferência gênica e a doxorrubicina ou 5-FU, mesmo nas menores doses testadas. Ensaios em andamento incluem a avaliacao da ativacao de celulas dentriticas humanas expostas para as celulas tumorais tratadas com os vetores portadores de p53 e/ou IFNbeta. Com este projeto, nossa abordagem de transferência gênica revelará a resposta aos transgenes em modelo humano e também abrirá o caminho para estudar o envolvimento do sistema imune humano
- Imprenta:
- Data da defesa: 26.10.2018
- Status:
- Artigo publicado em periódico de acesso aberto (Gold Open Access)
- Versão do Documento:
- Versão publicada (Published version)
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-
ABNT
DEL VALLE, Paulo Roberto. As vias de p53/ARF e interferon beta como alvos de terapia gênica de carcinoma colorretal. 2018. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2018. Disponível em: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-14012019-150409/. Acesso em: 02 abr. 2026. -
APA
Del Valle, P. R. (2018). As vias de p53/ARF e interferon beta como alvos de terapia gênica de carcinoma colorretal (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-14012019-150409/ -
NLM
Del Valle PR. As vias de p53/ARF e interferon beta como alvos de terapia gênica de carcinoma colorretal [Internet]. 2018 ;[citado 2026 abr. 02 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-14012019-150409/ -
Vancouver
Del Valle PR. As vias de p53/ARF e interferon beta como alvos de terapia gênica de carcinoma colorretal [Internet]. 2018 ;[citado 2026 abr. 02 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-14012019-150409/
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