Estudo estrutural de enzimas relacionadas com a modificação nas posições C3\" e C6\' da biossíntese de gentamicina (2018)
- Authors:
- Autor USP: ARAUJO, NATALIA CERRONE - ICB
- Unidade: ICB
- Sigla do Departamento: BMM
- Subjects: ANTIBIÓTICOS; AMINOGLICOSÍDEOS; ENZIMAS; PRODUTOS NATURAIS; CRISTALOGRAFIA QUÍMICA
- Keywords: Aminoglicosídeo; aminoglycosides; Cristalografia; crystallography; gentamicin; Gentamicina; Natural products; Produtos naturais
- Language: Português
- Abstract: Antibióticos antimicrobianos são moléculas capazes de inibir o crescimento de microrganismos, na maioria, produtos naturais derivados de fungos ou bactérias que bloqueiam processos cruciais para a sobrevivência de microrganismos. A gentamicina é um aminoglicosídeo 4,6 bisubstituído que exerce papel importante no tratamento de infecções graves causadas por bactérias gram-negativas; apresenta uma complexa e pouco entendida rota de biossíntese. Dessa via, a desidrogenase GenD2 e a aminotransferase GenS2 atuam sobre a posição C3 da gentamicina A2 produzindo gentamicina X2, e a GenB2 atua na posição C6 epimerizando a molécula de gentamicina C2a. As enzimas foram purificadas por cromatografia de afinidade e por exclusão de tamanho, no tampão composto por 50 mM de Tris HCl, 100 mM de NaCl pH 7,7. Com a intenção de compreender a rota de biossíntese da gentamicina, o objetivo deste trabalho foi estudar estruturalmente as enzimas GenD2, GenS2 e GenB2 em complexo com seus cofatores e ligantes. Cristais da enzima GenD2 difrataram, porém não foi possível determinar sua estrutura, análises biofísicas através de calorimetria de titulação isotérmica e por gel filtração analítica, puderam confirmar seu cofator, o NAD+, e um estado oligomérico compatível à um tetrâmero em solução. A enzima GenB2 em complexo com o cofator PMP e gentamicina X2 difratou a uma resolução de 1,7 Å e foi resolvida por substituição molecular, na qual foi identificada uma molécula na unidade assimétrica pertencente ao grupo espacial C 2 2 21.Essa enzima é um homodímero, seu sítio de ligação está na interface entre os protômeros com contribuições de resíduos de ambas as moléculas. A região onde se encontra o anel pirimidínico do PMP é carregada positivamente, favorecendo a interação com o cofator. A cavidade onde se encontra posicionada a gentamicina X2, é bastante ampla e eletronegativa, por seu substrato ser um aminoglicosídeo. A lisina 227 é o resíduo que realiza a clássica base de Schiff, presente em enzimas PLP/PMP dependentes, entre o anel pirimidínico do PMP e a tirosina 124. Os avanços promissores sobre a GenD2 e a compreensão estrutural da GenB2 auxiliam no entendimento da via de biossíntese de gentamicina bem como contribuem para o crescente entendimento sobre o enovelamento de enzimas PLP dependentes
- Imprenta:
- Data da defesa: 06.06.2018
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ABNT
ARAUJO, Natalia Cerrone de. Estudo estrutural de enzimas relacionadas com a modificação nas posições C3\" e C6\' da biossíntese de gentamicina. 2018. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-26072018-155944/. Acesso em: 29 dez. 2025. -
APA
Araujo, N. C. de. (2018). Estudo estrutural de enzimas relacionadas com a modificação nas posições C3\" e C6\' da biossíntese de gentamicina (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-26072018-155944/ -
NLM
Araujo NC de. Estudo estrutural de enzimas relacionadas com a modificação nas posições C3\" e C6\' da biossíntese de gentamicina [Internet]. 2018 ;[citado 2025 dez. 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-26072018-155944/ -
Vancouver
Araujo NC de. Estudo estrutural de enzimas relacionadas com a modificação nas posições C3\" e C6\' da biossíntese de gentamicina [Internet]. 2018 ;[citado 2025 dez. 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-26072018-155944/ - Estudo estrutural de enzimas relacionadas com a modificação nas posições C3\" e C6\' da biossíntese de gentamicina
- Structural and functional basis of GenB2 isomerase activity from Gentamicin biosynthesis
- Crystal structure of genD2, an NAD-dependent oxidoreductase involved in the biosynthesis of gentamicin
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