Otimização da associação da criopreservação do tecido ovariano bovino com cultivo folicular in vitro em sistema tridimensional para a obtenção de oócitos maduros com finalidade de preservação da fertilidade (2016)
- Authors:
- Autor USP: BULGARELLI, DAIANE LOPES - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGO
- Subjects: CRIOPRESERVAÇÃO; OVÁRIO; FOLÍCULO OVARIANO
- Language: Português
- Abstract: Introdução: a possibilidade da criopreservação do tecido ovariano para posterior cultivo in vitro dos folículos imaturos inclusos e obtenção de oócitos fertilizáveis tem sido sugerida como estratégia para preservação de fertilidade em pacientes oncológicas. Objetivo: avaliar diferentes estratégias de criopreservação de folículo secundário associado com maturação folicular in vitro em sistema tridimensional, capaz de garantir o crescimento até estágio de folículo antral, para obtenção de oócitos fertilizáveis. Metodologia: ovários bovino foram selecionados, cortados em fragmentos de 3x3x0.5mm3 e criopreservados pelo método de vitrificação (Ting et al 2013, modificado). Após a desvitrificação, os folículos secundários foram isolados, encapsulados em alginato (0.25%) e cultivados em ALFA-MEM e/ou TCM, ambos com 5ng/ml FSH por 15 dias em 5% CO2 (estratégia 1) ou tecido ovariano foi submetido ao cultivo por 6 dias (estratégia 2) em meio de cultura com ALFA-MEM suplementado, em placa de 48 poços e incubados em atmosfera úmida de 5% de CO2 e 38,5°C. Folículos secundários, também foram isolados mecanicamente do tecido ovariano fresco e vitrificados em solução de vitrificação contendo 25% de glicerol, 25% etilenoglicol e 12,5% de polímeros (PXZ) (estratégia 3), encapsulados em alginato (0.25%) e cultivados em dois diferentes meios base ALFA-MEM e TCM com 0.5 ng/ml FSH por 15 dias em 5% CO2. Foram avaliados o desenvolvimento dos folículos isolados ao longo do cutlivo, morfologia e viabilidade do tecido estromal. Resultados: na estratégia 1, não foi encontrado diferença estatística na taxa de folículos secundários normais entre os grupos tecido fresco e vitrificado (27%, 14%, respectivamente; p>0,05). O tecido vitrificado apresentou morfologia frouxa (p<0,001). Houve marcação pelo BrdU em células da granulosa em folículos ativados nos grupos frescos e vitrificados. Os folículos do grupo ALFA-MEM apresentarammelhor crescimento in vitro ao longo dos 15 dias de cultivo em comparação com TCM fresco (p=0,03). Enquanto, no grupo vitrificado não foi encontrado diferença estatística entre os grupos (p=0,29). Foi encontrado diferença estatística na taxa de sobrevida entre todos os grupos (p=0,04). Não houve diferença entre os grupos TCM e ALFA-MEM vitrificado na taxa de recuperação total de oócitos/COCs, recuperação de oócitos com morfologia normal (p=0,37), COCs (p>0,05), COC submetidos à MIV e houve diminuição do diâmetro oocitário pós MIV em todos os grupos, sendo que somente oócitos em vesícula germinativa foram obtidos. Na estratégia 2 foi encontrado menor taxa de folículos primordiais nos grupos cultivados fresco e vitrificado (p<0,01). No grupo vitrificado cultivado o tecido apresentou morfologia frouxa nas regiões da túnica e córtex. O crescimento entre os grupos fresco e vitrificado não houve diferença estatística (p=0,38). Não foi encontrado diferença entre os grupos fresco e vitrificados na taxa de sobrevida (56%;45%,respectivamente; p=1,0), formação da cavidade antral (0,9%; p=0,4), recuperação total de oócitos/COC (27%;64%; p=0,06), recuperação de oócitos e COCs normais (67%, 25%; p=0,27). Na estratégia 3, o meio ALFA-MEM apresentou melhor crescimento ao longo cultivo por 15 dias (p<0,01) em ambos os grupo. No final do cultivo foi encontrado diferença estatística na taxa de sobrevida entre todos os grupos (p=0,002). A taxa de formação da cavidade antral não foi encontrado diferença estatística entre folículos criopreservados nos dois grupos (p=0,99). Não foi encontrado diferença estatística na recuperação total de oócitos/COC, na recuperação de oócitos normais, COCs normais entre todos os grupos (p>0,05). Nos grupos vitrificados não houve diferença entre os COCs recuperados (p=0,1). No grupo ALFA-MEM vitrificado 33% apresentaramoócitos em estadio rompimento da vesícula germinativa. Conclusões: concluimos que em todas estas técnicas ocorreu dano à unidade folicular comprometendo o desenvolvimento ideal dos folículos secundários in vitro, onde o congelamento dos folículos secundários isolados ou in situ não proporcionou resultados superiores de um em relação ao outro. Porém, o cultivo prévio dos folículos ainda inclusos no tecido criopreservado (estratégia 2) influenciou negativamente a capacidade de desenvolvimento folicular quando comparados ao isolamento de folículos secundários para cultivo a partir de tecido criopreservado (estratégia 1) ou cultivo de folículos secundários criopreservados isoladamente (estratégia 3). Quando avaliado o desenvolvimento in vitro dos folículos secundários criopreservados, não obtivemos superioridade do meio ALFA-MEM em relação ao TCM, sendo que apenas no grupo fresco o meio ALFA-MEM mostrou melhores resultados. Porém, mais estudos são necessários para o aprimoramento do protocolo de maturação in vitro folicular
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2016
- Data da defesa: 29.08.2016
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ABNT
BULGARELLI, Daiane. Otimização da associação da criopreservação do tecido ovariano bovino com cultivo folicular in vitro em sistema tridimensional para a obtenção de oócitos maduros com finalidade de preservação da fertilidade. 2016. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2016. . Acesso em: 28 fev. 2026. -
APA
Bulgarelli, D. (2016). Otimização da associação da criopreservação do tecido ovariano bovino com cultivo folicular in vitro em sistema tridimensional para a obtenção de oócitos maduros com finalidade de preservação da fertilidade (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Bulgarelli D. Otimização da associação da criopreservação do tecido ovariano bovino com cultivo folicular in vitro em sistema tridimensional para a obtenção de oócitos maduros com finalidade de preservação da fertilidade. 2016 ;[citado 2026 fev. 28 ] -
Vancouver
Bulgarelli D. Otimização da associação da criopreservação do tecido ovariano bovino com cultivo folicular in vitro em sistema tridimensional para a obtenção de oócitos maduros com finalidade de preservação da fertilidade. 2016 ;[citado 2026 fev. 28 ]
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