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Tese

O envolvimento do complexo adaptador AP-3 na secreção regulada em mastócitos (2016)

  • Authors:
  • Autor USP: SILVA, ELAINE ZAYAS MARCELINO DA - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RBP
  • Subjects: MASTÓCITOS; BIOLOGIA CELULAR; BIOLOGIA MOLECULAR
  • Language: Português
  • Abstract: Os mastócitos são células secretoras especializadas e exercem grande parte de suas funções através da secreção regulada de mediadores, em particular, os mediadores pré-formados que são estacados em granulos secretores. Os grânulos dos mastócitos são considerados Organelas Relacionadas ao Lisossomo (Lysosome-Related Organeles - LROs), pois apresentam muitas características semelhantes aos lisossomos. A biogênese de LROs está relacionada com o sistema endolisossomal, onde o direcionamento de proteínas para organelas específicas depende de sinais que dirigem a incorporação destas proteínas em vesículas de transporte. Nesse sistema, os complexos adaptadores APs além de conectarem coberturas, como a clatrina, à membrana doadora, selecionam a carga e recrutam proteínas acessórias que regulam o brotamento e transporte vesicular. O complexo adaptador AP-3 atua no tráfego de proteínas entre as vias endocítica e biossintética abrangendo endossomos, lisossomos e LROs. O objetivo do presente estudo foi investigar o envolvimento do complexo adaptador AP-3 na secreção regulada de mastócitos da linhagem RBL-2H3. A distribuição de AP-3 em mastócitos foi investigada por imunofluorescência e imunocitoquímica ultraestrutural utilizando-se de um anticorpo contra a subunidade deita de AP-3. A imunofluorescência mostra que o complexo adaptador AP-3 está distribuído por todo o citoplasma e que se colocaliza, parcialmente, com proteínas marcadoras do complexo de Golgi, endossomos precoces e com Catepsina D. A análise ultraestrutural mostra que o complexo adaptador AP-3 se localiza em membranas e vesículas associadas ao complexo de Golgi e em estruturas tubulares e vesículas associadas a endossomos localizados próxima a membrana plasmática. Em mastócitos RBL-2H3 transduzidos com partículas lentivirais que codificam ShRNAs para a subunidade deita de AP-3 (AP381), os níveisde expressão de AP-3 estão diminuídos. Estas células apresentaram uma redução de 80% nos níveis de RNA mensageiro de AP381 e uma redução moderada nos níveis proteicos. Quando estimulados via Fc^£RI, os mastócitos knockdown para AP-3 apresentaram uma redução significativa na liberação do mediador préformado ~-hexosaminidase. O knockdown de AP-3 não resultou em alterações na expressão de FCERI na superfície dos mastócitos. Estas células também apresentam alterações morfológicas características da ativação dos mastócitos via FCERI. Mastócitos knockdown para AP-3 apresentaram uma diminuição na liberação de mediador lipídico PGD2 enquanto que a liberação de LTC4 não foi alterada. Em mastócitos knockdown para AP-3 houve um aumento na secreção de algumas citocinas neossintetizadas. O knockdown de AP-3 induziu um aumento na área dos granulos secretores dos mastócitos. Nestas células também ocorre uma redistribuirão da proteína integral de membrana CD63. 0 CD63 que se localiza na região perinuclear dos mastócitos RBL-2H3 foi redirecionado para estruturas periféricas nos mastócitos knockdown de AP-3. Nossos resultados indicam que A P-3 possui um papel na biogênese dos granulos secretores de mastócitos, através da segregação de proteínas que são envolvidas na exocitose destes grânulos. Assim, AP-3 é importante para a modulação da secreção regulada nos mastócitos
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 01.02.2016
    • How to cite
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    • ABNT

      SILVA, Elaine Zayas Marcelino da. O envolvimento do complexo adaptador AP-3 na secreção regulada em mastócitos. 2016. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2016. . Acesso em: 28 dez. 2025.

    • APA

      Silva, E. Z. M. da. (2016). O envolvimento do complexo adaptador AP-3 na secreção regulada em mastócitos (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

    • NLM

      Silva EZM da. O envolvimento do complexo adaptador AP-3 na secreção regulada em mastócitos. 2016 ;[citado 2025 dez. 28 ]

    • Vancouver

      Silva EZM da. O envolvimento do complexo adaptador AP-3 na secreção regulada em mastócitos. 2016 ;[citado 2025 dez. 28 ]

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