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Tese

Caracterização dos efeitos do mAB BGD6 nos mastócitos (2011)

  • Authors:
  • Autor USP: SILVA, ELAINE ZAYAS MARCELINO DA - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RBP
  • Subjects: MASTÓCITOS; INFLAMAÇÃO; SISTEMA IMUNE
  • Language: Português
  • Abstract: Os mastócitos são células efetoras multifuncionais do sistema imune que participam de processos alérgicos e inflamatórios, doenças auto-imunes e dos sistemas gastrointestinal, cardiovascular e nervoso. Os mastócitos se originam de um precursor agranulado residente na medula óssea. Células progenitores granuladas migram, através da corrente sanguínea, da medula óssea para tecidos periféricos, onde amadurecem sob influência de fatores do microambiente. Estudos do nosso laboratório identificaram o anticorpo monoclonal BGD6 como um marcador específico para a linhagem de mastócitos, reconhecendo desde o precursor até mastócitos maduros em roedores. Este anticorpo se liga a uma proteína de 110 kDa, ainda não identificada e ao receptor de baixa afinidade para IgG, FcγRIIB (CD32B), presentes na superfície de mastócitos. A ligação deste anticorpo à superfície dos mastócitos se dá através de sua porção Fab e essa interação é estabilizada pela ligação de sua porção Fc com o FcγRIIB. No presente trabalho investigamos se a interação entre o mAb BGD6 e a superfície de mastócitos pode influenciar processos biológicos como a ativação celular e liberação de mediadores. O anticorpo monoclonal BGD6 foi purificado, por cromatografia de afinidade, a partir do fluído ascítico produzido em camundongos Balb/C pela injeção do hibridoma AR57BD6II-B2. A caracterização do anticorpo foi realizada com células RBL-2H3, através de imunofluorescência indireta e citometria de fluxo. A liberação de mediadores pré-formados, neoformados e neo-sintetizados foi caracterizada em células da linhagem de mastócitos de rato RBL-2H3. A ativação dos fatores de transcrição NFAT e NFkB foi investigada em células RBL-2H3 NFAT-GFP-repórter (clone VB9) e NFκB-GFP-repórter (clone NFκB2). A ligação do mAb BGD6 à superfície dos mastócitos não induziu a liberação dos mediadores pré-formados β-hexosaminidase e histamina.O mAb BGD6 também não interferiu na capacidade dos mastócitos de liberar ,β-hexosaminidase após estímulo via FcεRI. Ademais, a ligação do mAb BGD6 à superfície dos mastócitos não promoveu a liberação do mediador lipídico neoformado LTB4 ou do mediador neo-sintetizado IL-4. Esses achados são consistentes com a habilidade do mAb BGD6 de se ligar à precursores comprometidos de mastócitos, que ainda não expressam o FcεRI em sua superfície. A ativação celular foi investigada quanto à capacidade do mAb BGD6 de promover alterações morfológicas na superfície de células RBL-2H3, o que não foi observado por de microscopia eletrônica de varredura. Os fatores de transcrição NFAT e NFκB também não foram ativados após a ligação de mAb BGD6 à superfície dos mastócitos. O fato do anticorpo monoclonal BGD6 não promover a ativação dos mastócitos não exclui apenas uma possível função na ativação, produção e liberação de mediadores, mas reafirma sua função como um marcador, pois além de ser especifico, pode ser utilizado in vitro sem causar ativação dessas células. Com o intuito de identificar o antígeno marcador da linhagem de mastócitos, foram realizadas varias tentativas de imunoprecipitar o antígeno do mAb BGD6, porém sem sucesso. Os resultados não foram satisfatórios, possivelmente, devido à baixa expressão protéica do antígeno e à baixa afinidade de ligação entre o antígeno e o anticorpo. Nossos achados contribuem para o entendimento da interação do mAb BGD6 com os mastócitos, mas a identificação de sua proteína ligante ainda é necessária
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 07.11.2011
    • How to cite
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    • ABNT

      SILVA, Elaine Zayas Marcelino da. Caracterização dos efeitos do mAB BGD6 nos mastócitos. 2011. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2011. . Acesso em: 17 out. 2024.

    • APA

      Silva, E. Z. M. da. (2011). Caracterização dos efeitos do mAB BGD6 nos mastócitos (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

    • NLM

      Silva EZM da. Caracterização dos efeitos do mAB BGD6 nos mastócitos. 2011 ;[citado 2024 out. 17 ]

    • Vancouver

      Silva EZM da. Caracterização dos efeitos do mAB BGD6 nos mastócitos. 2011 ;[citado 2024 out. 17 ]

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