Espectrometria de massas aplicada à identificação de actinobactérias e metabólitos bioativos (2016)
- Authors:
- Autor USP: FIGUEIRÓ, FERNANDA SALES - FFCLRP
- Unidade: FFCLRP
- Sigla do Departamento: 593
- Subjects: ACTINOMYCETACEAE; METABÓLITOS SECUNDÁRIOS; CANCRO (DOENÇA DE PLANTA)
- Language: Português
- Abstract: Avanços recentes em instrumentação tornaram a espectrometria de massas uma das ferramentas mais versáteis para o desenvolvimento de métodos analíticos em ciências. Desta forma, esta tese tem como principal objetivo a exploração da espectrometria de massas nos seus diferentes modos de aplicação para a identificação de actinobactérias e seus metabólitos ativos. Neste sentido, a espectrometria de massas empregando MALDI-TOF MS foi empregada na identificação de actinobactérias, com o propósito de avaliar seu potencial como uma ferramenta taxonômica complementar aos métodos tradicionais. As análises de MALDI-TOF MS foram inicialmente desenvolvidas com linhagens tipo de actinobactérias pertencentes aos géneros Streptomyces e Amycólatopsis. Para o desenvolvimento e validação da metodologia foram avaliados três diferentes procedimentos de preparo de amostra, os quais envolvem a análise direta das células na placa de MALDI e ainda duas metodologias de extração de biomoléculas da parede celular. A influência do tempo de cultivo com 3, 6 e 12 dias de crescimento e a influência do meio de cultivo GYEA, ISP2, TSBA, BDA, GYMA e NBIMCC-185, também foram avaliados. Os resultados obtidas no presente estudo mostraram que a metodologia empregando a análise de célula intacta foi a mais eficiente e rápida para a identificação das actinobactérias. Os resultados também mostraram que a variação do tempo de crescimento e meio de cultivo apresentaram mínima influência nas análises de actinobactérias por MALDI-TOF MS. Os espectros de MALDI-TOF MS obtidas para as linhagens tipo foram incluídos no banco de dados do software MALDI Biotyper 3.1 para ampliação e personalizarão da biblioteca. A aplicação da presente metodologia possibilitou a identificação prévia do gênero de 43 isolados de actinobactérias da nossa coleção de micro-organismos cuja descrição de gêneroou espécie ainda não havia sido determinada. Alguns dos isolados cuja descrição de género foi obtida pelas análises de MALDI-TOF MS foram submetidos aos ensaios de antagonismo e disco-difusão com o intuito de selecionar actinobactérias produtoras de compostos com atividade biológica contra a bactéria Xanthomonas citri subsp citri causadora do cancro cítrico. A presente triagem possibilitou a seleção de dois isolados Caat P5-8 e Caat 7-48 para os estudos de desreplicação e identificação dos compostos ativos empregando LC-MS/MS. No extraio bruto da Caat P5-8 foi possível identificar os compostos Kalafungina e Nanaomicina A, sendo a Kalafungina associada à atividade biológica. No extraio da Caat 7-48 foi identificado o composto Naftomicina J na fiação ativa e a desreplicação do extraio bruto ainda possibilitou a identificação de outros compostos pertencentes à classe das ansamicinas como a Naftomicina B e a Diastrovaricina I
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2016
- Data da defesa: 17.05.2016
-
ABNT
FIGUEIRÓ, Fernanda Sales. Espectrometria de massas aplicada à identificação de actinobactérias e metabólitos bioativos. 2016. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2016. . Acesso em: 28 dez. 2025. -
APA
Figueiró, F. S. (2016). Espectrometria de massas aplicada à identificação de actinobactérias e metabólitos bioativos (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Figueiró FS. Espectrometria de massas aplicada à identificação de actinobactérias e metabólitos bioativos. 2016 ;[citado 2025 dez. 28 ] -
Vancouver
Figueiró FS. Espectrometria de massas aplicada à identificação de actinobactérias e metabólitos bioativos. 2016 ;[citado 2025 dez. 28 ] - Desenvolvimento de uma metodologia analítica empregando a espectrometria de massas seqüencial na identificação de íons diagnósticos e perdas neutras de antibióticos produzidos por Streptomyces
- Bioguided isolation, characterization and media optimization for production of Lysolipins by actinomycete as antimicrobial compound against Xanthomonas citri subsp. citri
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