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Espectroscopia de correlação de fluorescência aplicada em estudos de sistemas moleculares, biológicos e celulares (2016)

  • Authors:
  • Autor USP: TSUTAE, FERNANDO MASSAYUKI - IFSC
  • Unidade: IFSC
  • Sigla do Departamento: FCM
  • Subjects: ESPECTROSCOPIA; FLUORESCÊNCIA; MICROSCOPIA CONFOCAL
  • Keywords: Confocal microscopy; Espectroscopia de correlação de fluorescência; Fluorescence correlation spectroscopy; Fluorescent dyes; Marcadores fluorescentes
  • Language: Português
  • Abstract: A espectroscopia de correlação de fluorescência (FCS) é uma das diferentes técnicas de análise por imagens de alta resolução espacial e temporal de biomoléculas em concentrações extremamente baixas. Ela se tornou uma técnica extremamente poderosa e sensível em áreas como bioquímica e biofísica. Como uma técnica bem estabelecida, ela é utilizada para medir concentrações locais de biomoléculas, através da marcação com moléculas fluorescentes. Coeficientes de difusão e constantes cinéticas também podem ser medidos através de FCS assim como detecção de molécula única. Ela também pode dar informação precisa sobre interações de antígeno-anticorpo, ácidos nucleicos e proteínas. Através de uma combinação de marcadores de alto rendimento quântico, fontes de luz estável (lasers), detecção ultrassensível e microscopia confocal, é possível realizar medidas de FCS em volumes de fentolitros (fL) e em concentrações de nanomolar (nM) em soluções aquosas ou em células vivas. Em contraste com outras técnicas de fluorescência, a sensibilidade da FCS aumenta com a diminuição da concentração do fluoróforo marcador, porque o parâmetro de interesse não é a intensidade de emissão de fluorescência, mas sim as flutuações espontâneas da fluorescência. Durante o tempo em que a partícula ou molécula atravessa o volume de medida pode ocorrer mudanças conformacionais e reações químicas e fotofísicas que alteram as características de emissão do fluoróforo e causam flutuações no sinal detectado. Estasflutuações são então monitoradas e transformadas em uma curva de autocorrelação, por intermédio de um software comercial que emprega um modelo físico apropriado para FCS. Em nosso estudo, utilizamos um marcador comercial (ALEXA 488®) para marcar proteínas. Primeiramente utilizamos a técnica de FCS para medir concentrações extremamente baixas de marcadores fluorescentes. Também realizamos um experimento testando a influência da viscosidade do meio na difusão livre do fluoróforo, assim como as melhores condições em que temos um melhor sinal de FCS. Por fim, estudamos a difusão de proteínas marcadas (PUC II e IV) em meio aquoso (PBS) e no interior de células
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 24.05.2016
  • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      TSUTAE, Fernando Massayuki; GUIMARÃES, Francisco Eduardo Gontijo. Espectroscopia de correlação de fluorescência aplicada em estudos de sistemas moleculares, biológicos e celulares. 2016.Universidade de São Paulo, São Carlos, 2016. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-14102016-101124/ >.
    • APA

      Tsutae, F. M., & Guimarães, F. E. G. (2016). Espectroscopia de correlação de fluorescência aplicada em estudos de sistemas moleculares, biológicos e celulares. Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-14102016-101124/
    • NLM

      Tsutae FM, Guimarães FEG. Espectroscopia de correlação de fluorescência aplicada em estudos de sistemas moleculares, biológicos e celulares [Internet]. 2016 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-14102016-101124/
    • Vancouver

      Tsutae FM, Guimarães FEG. Espectroscopia de correlação de fluorescência aplicada em estudos de sistemas moleculares, biológicos e celulares [Internet]. 2016 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-14102016-101124/

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