Espectroscopia de correlação de fluorescência aplicada em estudos de sistemas moleculares, biológicos e celulares (2016)
- Autores:
- Autor USP: TSUTAE, FERNANDO MASSAYUKI - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FCM
- Assuntos: ESPECTROSCOPIA; FLUORESCÊNCIA; MICROSCOPIA CONFOCAL
- Palavras-chave do autor: Confocal microscopy; Espectroscopia de correlação de fluorescência; Fluorescence correlation spectroscopy; Fluorescent dyes; Marcadores fluorescentes
- Idioma: Português
- Resumo: A espectroscopia de correlação de fluorescência (FCS) é uma das diferentes técnicas de análise por imagens de alta resolução espacial e temporal de biomoléculas em concentrações extremamente baixas. Ela se tornou uma técnica extremamente poderosa e sensível em áreas como bioquímica e biofísica. Como uma técnica bem estabelecida, ela é utilizada para medir concentrações locais de biomoléculas, através da marcação com moléculas fluorescentes. Coeficientes de difusão e constantes cinéticas também podem ser medidos através de FCS assim como detecção de molécula única. Ela também pode dar informação precisa sobre interações de antígeno-anticorpo, ácidos nucleicos e proteínas. Através de uma combinação de marcadores de alto rendimento quântico, fontes de luz estável (lasers), detecção ultrassensível e microscopia confocal, é possível realizar medidas de FCS em volumes de fentolitros (fL) e em concentrações de nanomolar (nM) em soluções aquosas ou em células vivas. Em contraste com outras técnicas de fluorescência, a sensibilidade da FCS aumenta com a diminuição da concentração do fluoróforo marcador, porque o parâmetro de interesse não é a intensidade de emissão de fluorescência, mas sim as flutuações espontâneas da fluorescência. Durante o tempo em que a partícula ou molécula atravessa o volume de medida pode ocorrer mudanças conformacionais e reações químicas e fotofísicas que alteram as características de emissão do fluoróforo e causam flutuações no sinal detectado. Estasflutuações são então monitoradas e transformadas em uma curva de autocorrelação, por intermédio de um software comercial que emprega um modelo físico apropriado para FCS. Em nosso estudo, utilizamos um marcador comercial (ALEXA 488®) para marcar proteínas. Primeiramente utilizamos a técnica de FCS para medir concentrações extremamente baixas de marcadores fluorescentes. Também realizamos um experimento testando a influência da viscosidade do meio na difusão livre do fluoróforo, assim como as melhores condições em que temos um melhor sinal de FCS. Por fim, estudamos a difusão de proteínas marcadas (PUC II e IV) em meio aquoso (PBS) e no interior de células
- Imprenta:
- Local: São Carlos
- Data de publicação: 2016
- Data da defesa: 24.05.2016
-
ABNT
TSUTAE, Fernando Massayuki. Espectroscopia de correlação de fluorescência aplicada em estudos de sistemas moleculares, biológicos e celulares. 2016. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2016. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-14102016-101124/. Acesso em: 26 abr. 2024. -
APA
Tsutae, F. M. (2016). Espectroscopia de correlação de fluorescência aplicada em estudos de sistemas moleculares, biológicos e celulares (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-14102016-101124/ -
NLM
Tsutae FM. Espectroscopia de correlação de fluorescência aplicada em estudos de sistemas moleculares, biológicos e celulares [Internet]. 2016 ;[citado 2024 abr. 26 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-14102016-101124/ -
Vancouver
Tsutae FM. Espectroscopia de correlação de fluorescência aplicada em estudos de sistemas moleculares, biológicos e celulares [Internet]. 2016 ;[citado 2024 abr. 26 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-14102016-101124/
Como citar
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
