Estudos funcionais e estruturais de uma endoglucanase de <i>Phanerochaete chrysosporium</i> da família 45 das hidrolases de glicosídeos (2015)
- Authors:
- Autor USP: RAMIA, MARINA PAGLIONE - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FCI
- Subjects: ENZIMAS (ESTUDO); CRISTALOGRAFIA; CELULOSE
- Keywords: Cellulase; Celulase; Cristalografia de macromoléculas; Endoglucanase; Glycoside hydrolase; Hidrolases de glicosídeos; Macromolecular crystallography
- Language: Português
- Abstract: A importância do estudo das celulases não se limita à aquisição de conhecimento científico, mas também ao grande potencial biotecnológico que elas representam. Isso se deve ao fato da celulose ser a molécula mais abundante presente na natureza e prover uma vasta gama de produtos e processos sustentáveis. Muitas famílias de celulases já foram bem caracterizadas, enquanto outras permanecem ainda desconhecidas. Dentre estas últimas, a família 45 das hidrolases de glicosídeos é a família de celulases fúngicas menos caracterizada tanto estruturalmente quanto funcionalmente. Recentemente foi proposta a divisão dessa família em três subfamílias e, até agora, apenas membros da subfamília A tiveram enzimas estruturalmente elucidadas. Nesse trabalho reportamos a estrutura cristalográfica da proteína recombinante endoglucanase de Phanerochaete chrysosporium (PcCel45A), a primeira das hidrolases de glicosídeos da subfamília C, e seu complexo com celobiose a 1,4 Å e 1,7 Å de resolução, respectivamente. A PcCel45A é uma enzima de domínio único, com uma estrutura em β-barril e seu empacotamento geral remete ao formato de âncora. O sítio ativo da enzima forma um longo sulco na superfície da estrutura, sendo que o seu centro catalítico é diferente das outras enzimas publicadas dessa família e o aspartato catalítico, que atua como aceptor de próton na reação de inversão, (Asp10) não é conservado. Adicionalmente, a estrutura cristalográfica dessa enzima apresenta maissimilaridades com as β-expansinas (proteínas de plantas) e transglicosilases líticas (proteínas que clivam o peptidoglicano de bactérias) do que com as outras representantes da família 45, o que a torna ainda mais singular. Para entendermos melhor seu funcionamento foram realizadas mutações sítio-dirigidas nos principais resíduos do sítio ativo. O Asp121, conhecido por participar da reação de inversão das outras enzimas da família como doador de próton, mostrou-se essencial para a atividade da enzima, enquanto que outros resíduos conservados como a Tyr25, o Trp161 e o Asp92 afetaram, mas não aniquilaram a atividade da enzima, apresentando aproximadamente 20%, 50% e 10% da atividade da enzima nativa, respectivamente
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2015
- Data da defesa: 07.12.2015
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ABNT
RAMIA, Marina Paglione. Estudos funcionais e estruturais de uma endoglucanase de <i>Phanerochaete chrysosporium</i> da família 45 das hidrolases de glicosídeos. 2015. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2015. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-10032016-150356/. Acesso em: 07 out. 2024. -
APA
Ramia, M. P. (2015). Estudos funcionais e estruturais de uma endoglucanase de <i>Phanerochaete chrysosporium</i> da família 45 das hidrolases de glicosídeos (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-10032016-150356/ -
NLM
Ramia MP. Estudos funcionais e estruturais de uma endoglucanase de <i>Phanerochaete chrysosporium</i> da família 45 das hidrolases de glicosídeos [Internet]. 2015 ;[citado 2024 out. 07 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-10032016-150356/ -
Vancouver
Ramia MP. Estudos funcionais e estruturais de uma endoglucanase de <i>Phanerochaete chrysosporium</i> da família 45 das hidrolases de glicosídeos [Internet]. 2015 ;[citado 2024 out. 07 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-10032016-150356/
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