Estudo celular, bioquímico e biofísico da enzima selenofosfato sintetase de <i>Naegleria gruberi</i> (2015)
- Authors:
- Autor USP: BELLINI, NATALIA KARLA - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FCI
- Subjects: AMINOÁCIDOS; PROTEÍNAS; ENZIMAS
- Keywords: Naegleria gruberi; Selenocisteína; Selenocysteine; Selenofosfato sintetase; Selenophosphate synthetase
- Language: Português
- Abstract: O microrganismo alvo deste estudo pertence ao gênero Naegleria, que compreende amebas de vida livre amplamente distribuídas ao redor do mundo. Estas possuem estratégias de adaptação em condições de temperatura e pH que envolvem a diferenciação das células para as formas flagelada e cística. A via de biossíntese e incorporação do aminoácido selenocisteína (Sec, U) em N. gruberi foi descrita e, devido à incorporação co-traducional deste aminoácido em resposta a um códon UGA em fase de leitura, possui diversos fatores específicos que tornam a via alvo de estudos moleculares. Dentre os genes identificados, destaca-se o de selenofosfato sintetase (SPS), uma proteína funcionalmente dimérica envolvida na catálise da conversão de seleneto e adenosina 5´-trifosfato (ATP) em selenofosfato, essencial à síntese de Sec. Diferindo das SPSs homólogas, em N. gruberi a proteína (NgSPS2) é codificada em fusão N-terminal com uma metiltransferase e totaliza 737 aminoácidos. Esta descoberta motivou os objetivos da pesquisa baseada na investigação celular de NgSPS2 nativa nas três diferentes formas de vida de N. gruberi através de ensaios imunoenzimáticos, e a caracterização bioquímica e biofísica da proteína recombinante. A análise dos resultados obtidos por Western blot indicaram que NgSPS2, in vivo, apresenta os dois domínios metiltransferase e SPS separados após a tradução para uma cultura amebóide e, após alcançar a diferenciação de cada uma das formas isoladamente, este resultado seconfirmou também para cistos e flagelados. A investigação de N. gruberi em cultura indica o aumento na atividade da via de síntese de selenoproteínas na presença de selênio conferindo resistência às condições de estresse oxidativo. A caracterização bioquímica do domínio C-terminal de NgSPS2, por cromatografia de exclusão molecular analítica e eletroforese não desnaturante, revelou predominância de dímeros em solução, coerente com SPSs homólogas. Os testes de cristalização não resultaram na obtenção de cristais, porém a proteólise limitada permitiu selecionar tripsina como potencial para a clivagem do N terminal do N terminal flexível. A conservação dos resíduos de aminoácidos funcionais em NgSPS2.CTD e seu comportamento em solução confirmam a obrigatoriedade da união de cada monômero e, por isso o domínio metiltransferase adicional pode ser desfavorável à montagem do dímero e in vivo a fusão é desfeita após a tradução
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2015
- Data da defesa: 16.07.2015
-
ABNT
BELLINI, Natalia Karla. Estudo celular, bioquímico e biofísico da enzima selenofosfato sintetase de <i>Naegleria gruberi</i>. 2015. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2015. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-17092015-105838/. Acesso em: 28 dez. 2025. -
APA
Bellini, N. K. (2015). Estudo celular, bioquímico e biofísico da enzima selenofosfato sintetase de <i>Naegleria gruberi</i> (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-17092015-105838/ -
NLM
Bellini NK. Estudo celular, bioquímico e biofísico da enzima selenofosfato sintetase de <i>Naegleria gruberi</i> [Internet]. 2015 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-17092015-105838/ -
Vancouver
Bellini NK. Estudo celular, bioquímico e biofísico da enzima selenofosfato sintetase de <i>Naegleria gruberi</i> [Internet]. 2015 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-17092015-105838/ - Estudo celular, bioquímico e biofísico da enzima selenofosfato sintetase de <i>Naegleria gruberi</i>
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