Tese

Trailer Hitch e a formação de grânulos de estresse em células S2 (2015)

• Authors:
  • Queiroz, Mariana Santos de
  • Paço-Larson, Maria Luísa (Orientador)
• Autor USP: QUEIROZ, MARIANA SANTOS DE - FMRP
• Unidade: FMRP
• Sigla do Departamento: RBP
• Subjects: PROTEÍNAS; ESTRESSE; DROSOPHILA
• Language: Português
• Abstract: A proteína Trailer Hitch (Tral) de Drosophila pertence à família de proteínas RAP55 (RNA associated protein-55), evolutivamente conservadas em eucariotos e que têm sido demostrada ser essencial para a formação de processing bodies (PBs) em diversos organismos, e também localizar-se em grânulos de estresse (GS), notoriamente em humanos. PB e GS são complexos de ribonucleoproteinas (RNP) dinânimos, cuja formação é dependente do pool de mRNAs reprimidos traducionalmente. Enquanto os PBs são presentes constitutivamente e estão intimamente ligados a maquinaria de degradação de mRNAs, os GS são formados pelos complexos de iniciação da tradução que se acumulam em consequência da repressão da tradução induzida por estresse. Recentemente tem sido proposta uma relação entre a atividade de GS e neurotoxicidade, o que torna a investigação de mecanismos moleculares envolvidos na dinâmica de montagem e desmontagem dos GS potencialmente relevante para o desenvolvimento de terapias para estas doenças. Neste contexto, investigamos a distribuição espacial da proteína Tral inteira e de suas formas truncadas em domínios conservados, em relação à GS formados em células S2 submetidas a estresses oxidativo e térmico. Para isso, construímos diferentes recombinantes de Tral fusionadas a mcherry na região amino-terminal: Tral_FL (2,0kb), Tral inteira; Tral_ΔN (1,7kb), deletada no domínio Lsm; Tral_Lsm (0,23kb), somente o domínio Lsm; Tral_ΔC (1,1kb) com o motif RGG mas não o domínio FDF; Tral_RGG (0,9kb) somente o motif RGG; Tral_ΔRGG2 (1,74kb), deletada no domínio RGG box2, e analisamos por microscopia confocal o padrão de distribuição subcelular da Tral endógena e das diferentes recombinantes em relação as proteínas marcadoras de GS ROX8 e PABP. Os resultados obtidos demonstram que assim como o descrito para suas ortólogas, a Tral endógena, assim como a Tral_FLrecombinante, colocaliza-se com os marcadores especificos de GS. Esta localização ocorre de modo independente do domínio FDF e do dominio Lsm, previamente demonstrado ser necessário para a localização de Tral em PB. Por outro lado, de modo interessante verificamos que o domínio RGG é requerido para a localização de Tral em GS, colocando essa região da molécula como possível reguladora da formação de grânulos Tral-positivos. Neste trabalho também estendemos a análise da localização de Tral em relação à proteína ataxina-2, uma proteína ligante de RNA sabidamente relacionada com doenças neurodegenerativas, e cuja localização em grânulos de estresse em conjunto com PABP tem sido indicada como parte do mecanismo de neurotoxicidade induzida por TDP-43, em modelos de atrofia amiotrofica lateral (ELA). De modo importante verificamos que a dAtx2, mas não PABP, é recrutada para grânulos de Tral em células transfectadas com Tral_FL independente do estímulo de estresse. Isso sugere que dAtx2 interage com Tral, e que essa interação antecede a relocação de PABP para o GS. No conjunto estes dados indicam Tral como nucleadora de GS contendo dAtx2 e assim um alvo interessante para interferências na dinâmica de montagem/desmontagem de GS, com potencial relevância para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas para doenças neurodegenerativas.
• Imprenta:
  • Publisher place: Ribeirão Preto
  • Date published: 2015
• Data da defesa: 26.02.2015

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How to cite

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• ABNT

  QUEIROZ, Mariana Santos de. Trailer Hitch e a formação de grânulos de estresse em células S2. 2015. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2015. . Acesso em: 23 abr. 2024.

• APA

  Queiroz, M. S. de. (2015). Trailer Hitch e a formação de grânulos de estresse em células S2 (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

• NLM

  Queiroz MS de. Trailer Hitch e a formação de grânulos de estresse em células S2. 2015 ;[citado 2024 abr. 23 ]

• Vancouver

  Queiroz MS de. Trailer Hitch e a formação de grânulos de estresse em células S2. 2015 ;[citado 2024 abr. 23 ]

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