Expressão heteróloga em Aspergillus nidulans e caracterização bioquímica e estrutural de uma endoglucanase de Aspergillus terreus (2015)
- Authors:
- Autor USP: MULINARI, EVANDRO JOSÉ - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FCI
- Subjects: BIOCOMBUSTÍVEIS; FUNGOS; ASPERGILLUS; ETANOL
- Language: Português
- Abstract: A degradação enzimática rápida, eficiente e robusta de polissacarídeos derivados de biomassa lignocelulósica é atualmente um grande desafio na produção de biocombustíveis e considerada uma alternativa viável e promissora para se enfrentar a crise energética mundial e diminuir a dependência das fontes fósseis de energia. O bagaço de cana-de-açúcar no Brasil é a principal matéria lignocelulósica sustentável de grande potencial para a produção do etanol de 2ª geração. O principal requisito para a consolidação dessa abordagem é a disponibilidade de enzimas que hidrolisam a celulose, hemicelulose e outros polissacarídeos em açúcares fermentescíveis e em condições adequadas para a utilização industrial. O presente estudo visou à caracterização molecular, estrutural e funcional da endoglucanase GH12 do fungo Aspergillus terreus (AtGH12) por diferentes técnicas. O gene que codifica para essa enzima foi clonado e expressado no fungo filamentoso A. nidulans linhagem A773. A cepa com maior secreção foi selecionada e a sequência da enzima confirmada por espectrometria de massas MALDI TOF MS. Posteriormente, através de estudos funcionais de parametrização enzimática como pH e temperatura ótimos, estabilidade térmica, efeitos supressores e potencializadores de aditivos, a enzima AtGH12 foi caracterizada bioquímica e fisicamente. A espectrometria de massas do substrato hidrolisado pela catálise enzimática foi tomada como uma forma de investigar o padrão de clivagem da hidrólise e estudo doreconhecimento enzima/substrato para a AtGH12. As caracterizações estruturais das enzimas recombinantes obtidas utilizando as técnicas de espalhamento dinâmico de luz, dicroísmo circular, espalhamento de raios X a baixo ângulo e gel nativo serviram para determinação do enovelamento e estado oligomérico em solução da AtGH12. Com o intuito de fornecer subsídios para o desenvolvimento de coquetéis enzimáticos mais eficazes para hidrólise da biomassa lignocelulósica, a atividade da AtGH12 foi avaliada frente ao bagaço de cana-de-açúcar pré-tratados pelos processos hidrotérmicos e organossolve. Posteriormente, o seu grau de sinergismo nesse tipo de substrato foi determinado com o coquetel enzimático comercial Acellerase®
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2015
- Data da defesa: 23.02.2015
-
ABNT
MULINARI, Evandro José. Expressão heteróloga em Aspergillus nidulans e caracterização bioquímica e estrutural de uma endoglucanase de Aspergillus terreus. 2015. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2015. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-07052015-085141/. Acesso em: 09 nov. 2024. -
APA
Mulinari, E. J. (2015). Expressão heteróloga em Aspergillus nidulans e caracterização bioquímica e estrutural de uma endoglucanase de Aspergillus terreus (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-07052015-085141/ -
NLM
Mulinari EJ. Expressão heteróloga em Aspergillus nidulans e caracterização bioquímica e estrutural de uma endoglucanase de Aspergillus terreus [Internet]. 2015 ;[citado 2024 nov. 09 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-07052015-085141/ -
Vancouver
Mulinari EJ. Expressão heteróloga em Aspergillus nidulans e caracterização bioquímica e estrutural de uma endoglucanase de Aspergillus terreus [Internet]. 2015 ;[citado 2024 nov. 09 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-07052015-085141/ - Análise do secretoma do fungo termofílico Thermothielavioides terrestris: prospecção, expressão heteróloga e caracterizações biofísicas e bioquímicas de algumas enzimas
- Clonagem e caracterização de enzimas identificadas no secretoma do fungo termofílico Thielavia terrestris
- Prospection, biophysical, and structural characterization of new carbohydrate-active enzymes with biotechnological applications
- Functional and structural characterization of an α-ʟ-arabinofuranosidase from Thermothielavioides terrestris and its exquisite domain-swapped β-propeller fold crystal packing
- Functional and structural characterisation of an α-L-arabinofuranosidase from Thielavia terrestris: the first β-propeller fold adopted through an exquisite domain-swapping in GH62 family
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