Implementação de ferramentas moleculares para a manipulação genética da haloarchaea Halobacterium salinarum (2014)
- Authors:
- Autor USP: PONTELLI, MARJORIE CORNEJO - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBI
- Subjects: BIOQUÍMICA; GENÉTICA (MANIPULAÇÃO); RNA
- Language: Português
- Abstract: Halobacterium salinarum, um halófilo obrigatório e membro do domínio Archaea, possui características peculiares como a morfologia procariótica e sistema de processamento da informação genética similar a eucariotos. Análises fisiológicos, bioquímicas e moleculares têm revelado aspectos únicos envolvidos no extremo halofilismo desta arqueia. No entanto, a investigação da função de genes in vivo por meio de análises genéticas é dificultada pelo flato dos sistemas genéticos disponíveis para manipulação deste organismo serem limitados. O presente trabalho buscou dar início a padronização e desenvolvimento de novas ferramentas moleculares para a manipulação genética de H. salinarum. Primeiramente, foi padronizada a técnica de circularização de RNAs que mapeou no genoma as extremidades 5’ e 3’ do possível ncRNA chamado -4TVdexpress, membro da família HgcC de ncRNAs. Além disso, foram caracterizados os elementos promotor e terminador para a utilização destes em novos vetares modulares. Para otimizar um promotor forte, o promotor da ferredoxina Pfdx foi editado através da introdução de quatro mutações pontuais na região UAS gerando o promotor sintético Pzero. Através da clonagem de Pzero em um sistema repórter GFP, foi observado que o promotor foi funcional, com força equivalente ao promotor nativo Pfdx. Para o estudo de terminadores de transcrição, 200 pb da região 3’ de dois genes altamente expressos foram clonados em um sistema repórter controlado por um promotor forte para verificar a eficácia de terminação dos fragmentos clonados. Os níveis de GFP das linhagens contendo os terminadores foram similares aos níveis do vetor controle sem promotor, mostrando a eficiente terminação dos fragmentos clonados. Esses resultados tem direta aplicação no desenvolvimento de ferramentas genéticas otimizadas para H. salinarum que possibilitarão o avanço nacaracterização molecular funcional de diversos genes, incluindo ncRNAs.
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2014
- Data da defesa: 20.10.2014
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ABNT
PONTELLI, Marjorie Cornejo; KOIDE, Tie. Implementação de ferramentas moleculares para a manipulação genética da haloarchaea Halobacterium salinarum. 2014.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2014. -
APA
Pontelli, M. C., & Koide, T. (2014). Implementação de ferramentas moleculares para a manipulação genética da haloarchaea Halobacterium salinarum. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Pontelli MC, Koide T. Implementação de ferramentas moleculares para a manipulação genética da haloarchaea Halobacterium salinarum. 2014 ; -
Vancouver
Pontelli MC, Koide T. Implementação de ferramentas moleculares para a manipulação genética da haloarchaea Halobacterium salinarum. 2014 ;
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