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Biorreatores capilares de NTPDase-1 de Trypanosoma cruzi: desenvolvimento e aplicação na triagem de inibidores seletivos (2014)

  • Authors:
  • Autor USP: CALIL, FELIPE ANTUNES - FFCLRP
  • Unidade: FFCLRP
  • Sigla do Departamento: 593
  • Subjects: TRYPANOSOMA CRUZI; ENZIMAS; IMOBILIZAÇÃO; CROMATOGRAFIA LÍQUIDA
  • Keywords: Expressão heteróloga; Heterologous expression; Immobilization of enzymes; Imobilização de enzimas; NTPDase-1 T.cruzi; NTPDase-1 T.cruzi; Ensaios enzimáticos; Enzymatic assays
  • Language: Português
  • Abstract: Uma das estratégias utilizadas no desenvolvimento de novas drogas envolve a descoberta de compostos que modulem a atividade de enzimas, importantes no processo infeccioso de patógenos. Uma abordagem interessante na triagem de novos ligantes é o uso de métodos baseados na imobilização de enzimas em suportes cromatográficos acoplados a sistemas de cromatografia líquida. O uso de IMERs (Immobilized Enzyme Reactors) como uma fase estacionária acoplado a sistemas de cromatografia líquida de alta eficiência consiste em uma estratégia para triagem de compostos rápida e eficiente e tem vantagens em relação ao uso de enzimas em solução. A enzima NTPDase-1 de Trypanosoma cruzi age como um facilitador da infecção do patógeno, inibindo assim a resposta imune do hospedeiro, permitindo uma infecção silenciosa, o que sugere seu uso como um bom alvo na busca por inibidores. Neste trabalho, a enzima NTPDase-1 foi imobilizada na parede interna de capilares de sílica fundida formando ICERs (Immobilized Capillary Enzyme Reactors). Estudos das condições de uso destes biorreatores juntamente com o desenvolvimento de um método cromatográfico multidimensional, foram realizados e validados. A otimização do método cromatográfico e sua validação, apresentaram ótimos resultados em relação aos valores obtidos para os parâmetros avaliados para métodos bioanalíticos. A imobilização da enzima foi realizada com sucesso, sendo possível a detecção da atividade catalítica no sistema cromatográfico (TcNTPDase1-ICER). Foi realizado também, o estudo cinético para ATP no TcNTPDase1-ICER, obtendo-se KM de 0,317 ± 0,044 mM, que comparado com estudos em solução, KM de 0,096 mM, ainda apresenta grande afinidade pelo substrato
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 26.05.2014
  • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      CALIL, Felipe Antunes; CARDOSO, Carmen Lúcia. Biorreatores capilares de NTPDase-1 de Trypanosoma cruzi: desenvolvimento e aplicação na triagem de inibidores seletivos. 2014.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2014. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-21072014-144130/ >.
    • APA

      Calil, F. A., & Cardoso, C. L. (2014). Biorreatores capilares de NTPDase-1 de Trypanosoma cruzi: desenvolvimento e aplicação na triagem de inibidores seletivos. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-21072014-144130/
    • NLM

      Calil FA, Cardoso CL. Biorreatores capilares de NTPDase-1 de Trypanosoma cruzi: desenvolvimento e aplicação na triagem de inibidores seletivos [Internet]. 2014 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-21072014-144130/
    • Vancouver

      Calil FA, Cardoso CL. Biorreatores capilares de NTPDase-1 de Trypanosoma cruzi: desenvolvimento e aplicação na triagem de inibidores seletivos [Internet]. 2014 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-21072014-144130/


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