Bases moleculares da diferenciação "in vitro" de células T a partir de células CD34+ isoladas de sangue de cordão umbilical (2013)
- Authors:
- Autor USP: OLIVEIRA, LUCILA HABIB BOURGUIGNON - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RCM
- Subjects: CÉLULAS-TRONCO; CORDÃO UMBILICAL; LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA; IMUNOLOGIA CELULAR
- Language: Português
- Abstract: Apesar do crescente conhecimento sobre os microRNAs (miRNAs) em processos de diferenciação celular, suas funções no comprometimento das células progenitoras hematopoéticas (CPH) na linhagem T linfóide ainda são elusivas. A expressão dos miRNAs associa-se à patogênese de várias doenças hematológicas malignas, incluindo as leucemias linfóides agudas do tipo T (LLA-T). Para compreender o circuito molecular relacionado ao comprometimento e diferenciação dos linfócitos T e explorar o papel dos miRNAs na LLA-T, utilizamos CPH CD34+ obtidas de sangue de cordão umbilical (SCU) co-cultivadas com células estromais (OP9) que expressam o ligante Delta like 1 (OP9-DL1) da via Notch. As expressões gênicas diferenciais (RNAm e miRNA) foram avaliadas nas CPH cultivadas com as células OP9-DL1 ou OP9-GFP (controle) através de microarrays e validadas pela técnica de PCR em tempo real. Posteriormente, selecionamos um miRNA e avaliamos o transcriptoma de células Jurkat transfectadas com moléculas sintéticas mímicas (pré-miR) ou inibidoras (anti-miR) do miRNA de interesse. O conjunto de genes hipo expressos nas células transfectadas pelo pré-miR e, simultaneamente, hiper expressos nas células transfectadas pelo correspondente anti-miR, foram comparados com alvos preditos por base de dados computacional (miRanda). Em seguida, avaliamos funcionalmente o status de metilação do DNA pela técnica de MS-PCR e quantificamos a expressão do miRNA de interesse e dos transcritos alvos selecionados em amostras de pacientes com LLA-T. A partir dos resultados de co-cultivo, selecionamos o miR-29a. Os transcritos de DNTMTA, TET1 e TET2, envolvidos com o controle epigenético, apresentaram-se em menores níveis nas CPH co-cultivadas com as OP9-DL1. As análises após transfecção identificaram um grupo de transcritos, incluindo TET1, TET2 e TDG, como potencialmente modulados pelo miR-29a. Os elevados níveis domiR-29a e reduzidos níveis dos alvos DNMT3b, TET1 e TET3 nas Jurkat transfectadas com o pré-miR-29a, validaram nossa abordagem. Essas células revelaram uma demetilação do DNA, comparadas com o controle. Finalmente, a avaliação dos transcritos nos subgrupos de pacientes com LLA-T apresentou uma correlação negativa entre o miR-29a e seus alvos DNMT3a, DNMT3b e TET1. Esses resultados demonstram um papel do miR-29a na patogênese molecular e epigenética da LLA-T e representam uma nova perspectiva para o potencial uso do miR-29a no tratamento dessa doença
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2013
- Data da defesa: 02.08.2013
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ABNT
OLIVEIRA, Lucila Habib Bourguignon. Bases moleculares da diferenciação "in vitro" de células T a partir de células CD34+ isoladas de sangue de cordão umbilical. 2013. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2013. . Acesso em: 10 nov. 2024. -
APA
Oliveira, L. H. B. (2013). Bases moleculares da diferenciação "in vitro" de células T a partir de células CD34+ isoladas de sangue de cordão umbilical (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Oliveira LHB. Bases moleculares da diferenciação "in vitro" de células T a partir de células CD34+ isoladas de sangue de cordão umbilical. 2013 ;[citado 2024 nov. 10 ] -
Vancouver
Oliveira LHB. Bases moleculares da diferenciação "in vitro" de células T a partir de células CD34+ isoladas de sangue de cordão umbilical. 2013 ;[citado 2024 nov. 10 ]
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