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Tese

Análise molecular do DNA mitocondrial em culturas de mioblastos derivadas de células satélites de pacientes com deleções únicas do DNA mitocondrial (2012)

  • Authors:
  • Autor USP: SARES, CLÁUDIA TARCILA GOMES - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RNP
  • Subjects: MITOCÔNDRIAS; DOENÇAS; CULTURA DE CÉLULAS; DNA MITOCONDRIAL; OFTALMOPATIAS
  • Language: Português
  • Abstract: As miopatias mitocondriais constituem um grupo heterogêneo de doenças que envolvem o metabolismo celular. Uma das formas mais frequentes de miopatia mitocondrial caracteriza-se pela presença de miopatia ocular com oftalmoparesia externa progressiva (PEO) e é causada por grandes rearranjos (deleções/duplicações) do DNA mitocondrial (DNAmt). Na literatura existem poucos estudos que avaliam a presença desses grandes rearranjos do DNAmt em células cultivadas a partir do tecido muscular desses pacientes (mioblastos). Os mioblastos derivam das células satélites, que são remanescentes do período embrionário e estão presentes no tecido muscular com papel importante na regeneração do músculo esquelético. Dentre estes estudos destacamos o de Moraes et al., 1989, que foi o único a demonstrar a presença de mutações nos mioblastos de apenas um paciente com quadro clínico da síndrome de Kearns-Sayre (KSS). Essa síndrome é uma das formas clínicas de miopatia mitocondrial caracterizada pela tríade clínica PEO e retinose pigmentar com início antes dos 20 anos, associada a ataxia e/ou bloqueio de ramo cardíaco e/ou elevação da proteína liquórica. Tais resultados impossibilitaram o uso de culturas de mioblastos primários como modelo experimental e fizeram surgir estratégias terapêuticas baseadas na lesão de fibras e indução da regeneração muscular. Considerando que os DNAmt mutantes do músculo esquelético nessa doença devem se originar no período embrionário e que as condições de cultivo podem influenciar a sobrevivência de células com deficiência da cadeia respiratória, delineamos o presente estudo. Estabelecemos culturas de mioblastos através de células satélites obtidas das biópsias musculares de onze pacientes com PEO cansada por grandes rearranjos do DNAmt, utilizando meio de cultura com nutrientes essenciais, capazes de permitir a sobrevivência de células com disfunção mitocondrial.Foram analisadas características clínicas e da disfunção mitocondrial à biópsia muscular, além da presença de porcentagem de moléculas de DNAmt no tecido muscular, no pool de mioblastos e em clones isolados pelos métodos de Southen blot e PCR. A idade de início dos sintomas variou de 7 a 46 anos (média de 17 anos) e o quadro clínico foi caracterizado por envolvimento multissistêmico em dez dos onze pacientes, sendo que um desses apresentava a KSS. A avaliação anatomopatológica demonstrou algumas fibras com disfunção mitocondrial em todos os pacientes, apresentando de 0,2 a 13% de fibras com proliferação mitocondrial anormal e de 0,4 a 11% de fibras com atividade da COX ausente. Na análise realizada por Southern blot no DNAmt do músculo esquelético, os onze pacientes apresentaram proporções variadas de DNAmt mutante, no entanto, na análise realizada no DNAmt do pool mioblastos foi observado DNAmt mutante em apenas uma paciente por esse método, a única na nossa casuística a apresentar o espectro clínico mais grave dessa doença, configurando o quadro da KSS. Já pelo método de PCR, DNAmt mutantes foram observados nos mioblastos de quatro pacientes. Também pelo método de PCR, realizamos a avaliação nos clones de mioblastos de todos os pacientes, sendo evidenciada a presença de DNAmt com deleção apenas nos clones da paciente com KSS, nos quais evidenciou-se a presença de proporções variadas de DNAmt mutantes, incluindo clones com população de 100% de DNAmt mutantes. Em conclusão, moléculas de DNAmt mutantes podem ser observadas em culturas de mioblastos de pacientes com PEO, e portanto, devem estar presentes em suas células satélites. A presença de proporções homoplásmicas de DNAmt mutantes, podem estar associadas ao fenótipo da KSS. Nosso estudo propicia a utilização de cultura primária de mioblastos com deleção do DNAmt como modelo experimental dessas doença. Nossos resultadostambém indicam ser necessário ter cautela ao se propor estratégias terapêuticas relacionadas à promoção de regeneração muscular especialmente em pacientes que apresentam KSS
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 18.10.2012
    • How to cite
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    • ABNT

      SARES, Cláudia Tarcila Gomes. Análise molecular do DNA mitocondrial em culturas de mioblastos derivadas de células satélites de pacientes com deleções únicas do DNA mitocondrial. 2012. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2012. . Acesso em: 23 maio 2025.

    • APA

      Sares, C. T. G. (2012). Análise molecular do DNA mitocondrial em culturas de mioblastos derivadas de células satélites de pacientes com deleções únicas do DNA mitocondrial (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

    • NLM

      Sares CTG. Análise molecular do DNA mitocondrial em culturas de mioblastos derivadas de células satélites de pacientes com deleções únicas do DNA mitocondrial. 2012 ;[citado 2025 maio 23 ]

    • Vancouver

      Sares CTG. Análise molecular do DNA mitocondrial em culturas de mioblastos derivadas de células satélites de pacientes com deleções únicas do DNA mitocondrial. 2012 ;[citado 2025 maio 23 ]

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