Identificação de elementos estruturais no "tRNA POT.sec"uca determinantes da ligação com proteínas (2012)
- Authors:
- Autor USP: MANZINE, LIVIA REGINA - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FFI
- Subjects: RNA; PROTEÍNAS (ESTUDO); ENZIMAS (ESTUDO)
- Keywords: Selenocisteína; Selenocisteína sintase; Selenocysteine; Selenocysteine synthase; tRNA<sup>sec</sup>
- Language: Português
- Abstract: Em Escherichia coli a formação e incorporação do aminoácido selenocisteína é um evento cotraducional dirigido pelo códon de terminação UGA e deve se a uma complexa via de biosíntese cujas principais proteínas envolvidas são: Selenocisteína sintase (SELA), Fator de elongação de selenocisteína (SELB), Selenofosfato sintetase (SELD), Seril-"tRNA POT.ser" sintetase, um tRNA de inserção de selenocisteína ("tRNA POT.sec " ou SELC) e uma sequência específica no RNA mensageiro, denominada de Sequência de inserção de selenocisteína (SECIS). A incorporação de selenocisteína em proteínas bacterianas inicia-se com a aminoacilação do "tRNA POT.sec" com serina pela enzima Seril-tRNA sintetase formando seril-"tRNA POT.sec" que é posteriormente convertido a selenocisteil- "tRNA POT.sec" pela enzima SELA através de selenofosfato. Dessa forma, o trabalho teve seu foco estabelecido na realização de estudos bioquímicos e biofísicos da proteína SELA e na análise da interação dessa proteína com o ligante SELC para determinação de parâmetros de ligação envolvidos na formação desse complexo. O gene codificante para a proteína SELA foi subclonado, expresso em linhagem bacteriana WL81460(DE3) e a proteína SELA foi purificada como descrito na literatura; entretanto, uma nova metodologia para sua purificação foi desenvolvida proporcionando maior rapidez e rendimento. Estudos de filtração em gel, eletroforese nativa, focalização isoelétrica, dicroísmo circular, espectroscopia de fluorescência intrínseca e crosslinking químico proporcionaram uma melhor caracterização da proteína SELA e consequentemente uma maior compreensão de seu comportamento em solução. Ensaios de espectroscopia de anisotropia de fluorescência revelaram que a proteína SELA é capaz de se associar em estruturas superiores ao estado decamérico;essa análise pôde ser corroborada principalmente por dados de microscopia eletrônica empregando a técnica de negative staining. A metodologia de anisotropia de fluorescência também permitiu analisar a interação da macromolécula SELA com o ligante específico SELC, bem como com outros tRNAs mutantes possibilitando a realização de um mapeamento das regiões de SELC importantes para a interação. Além disso, essa técnica também foi satisfatoriamente empregada na determinação da estequiometria de ligação do complexo SELA-SELC revelando a proporção de 1 molécula de SELA para 10 tRNAs, o que contraria dados literários publicados em 1991 e 1992.
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2012
- Data da defesa: 25.01.2012
-
ABNT
MANZINE, Livia Regina. Identificação de elementos estruturais no "tRNA POT.sec"uca determinantes da ligação com proteínas. 2012. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2012. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-21032012-093929/. Acesso em: 29 abr. 2025. -
APA
Manzine, L. R. (2012). Identificação de elementos estruturais no "tRNA POT.sec"uca determinantes da ligação com proteínas (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-21032012-093929/ -
NLM
Manzine LR. Identificação de elementos estruturais no "tRNA POT.sec"uca determinantes da ligação com proteínas [Internet]. 2012 ;[citado 2025 abr. 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-21032012-093929/ -
Vancouver
Manzine LR. Identificação de elementos estruturais no "tRNA POT.sec"uca determinantes da ligação com proteínas [Internet]. 2012 ;[citado 2025 abr. 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-21032012-093929/ - Identificação de elementos estruturais no "tRNA POT.sec"uca determinantes da ligação com proteínas
- Formation of a ternary complex for selenocysteine biosynthesis in bacteria
- Determinação estrutural do complexo selenocisteína sintase t-RNA de E. coli
- An efficient protocol for the production of tRNA-free recombinant Selenocysteine Synthase (SELA) from Escherichia coli and its biophysical characterization
- Assembly stoichiometry of bacterial selenocysteine synthase and SelC (tRNAsec)
- Investigation of Escherichia coli 'tRNA POT. Sec' and Selenocysteine Synthase (SELA)
- Estudos das relações entre estrutura e função de hidrolases de glicosídeos com múltiplos domínios: em busca de enzimas mais eficientes na depolimerização de biomassa lignocelulósica
- Structural determination of Selenocysteine Synthase complex (SelA) of Escherichia coli
- Biochemical characterization, low-resolution SAXS structure and an enzymatic cleavage pattern of BlCel48 from Bacillus licheniformis
- Identificação de elementos estruturais no tRNAsecuca determinantes da ligação com proteínas
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