Acidose metabólica e respiratória provocam diferentes efeitos sobre a isoforma 3 do trocador sódio/hidrogênio (NHE3) (2010)
- Authors:
- Autor USP: REBOUCAS, NANCY AMARAL - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: FISIOLOGIA (HUMANO)
- Language: Português
- Abstract: OBJETIVOS: Devido à importância do NHE3 na homeostase do pH, decidimos estudar os efeitos da acidose metabólica e respiratória sobre este trocador. Nossos dados anteriores demonstraram diferenças claras entre os efeitos das duas acidoses sobre o NHE3 (transcrição do DNA, RNAm e proteína). Observamos a tendência de supra regulação dos três parâmetros na acidose metabólica, mas na acidose respiratória estes parâmetros tendem a permanecer inalterados. Além disto, observamos que ao variar o nível de acidificação em cada tipo de acidose, o RNAm permanecia elevado na acidose metabólica e inalterado na respiratória, indicando que o pH não seria o responsável pelas respostas moleculares do NHE3 à acidose. Este trabalho visa avaliar os efeitos da acidose sobre a expressão da proteína-NHE3 especificamente na superfície da membrana apical de células OKP e o efeito de variações de pH dentro dos modelos de acidose metabólica e respiratória sobre a atividade de diferentes segmentos do promotor do NHE3. MÉTODO E RESULTADOS: Células OKP foram submetidas a ensaios de acidose e controle, por 24 horas. O ensaio de acidose metabólica era produzido por adição de HCl ao meio de cultura celular, pH 6,9 (severa) ou 7,2 (branda). A acidose respiratória era produzida por aumento na pCO2 ambiente, de 40 mmHg para 80 mmHg (branda) ou 160 mmHg (severa). Na situação controle, o pH do meio de cultura era mantido em 7,4 (pCO2 de 40 mmHg). Após estes ensaios, as proteínas presentes na face externa da membrana celular de células OKP eram biotiniladas e coletadas por uma resina de estreptavidina. As proteínas eram submetidas a western/immunoblotting para NHE3A acidose metabólica severa (n=6) causou aumento de 2,09 vezes de abundância de NHE3 em relação ao controle (n=6), p<0,05. Na acidose respiratória branda (n=9), apesar de termos observado aumento de 51,2% em relação ao controle (n=9), essa diferença não foi significativa (p>0,05). Células OKP transfectadas com segmentos do promotor do gene NHE3, foram submetidas à acidose metabólica branda e respiratória severa, para avaliação da atividade do promotor. As acidoses metabólica severa e respiratória branda já haviam sido previamente avaliadas. Os segmentos utilizados foram clonados no vetor pGL3 que contém o gene repórter Firefly Luciferase. As regiões clonadas compreendem das posições -152 a +55 e de -2095 a +55. Ambos os segmentos de promotor, em ambas as acidoses, não mostraram aumento de atividade em relação ao controles (n=14 por grupo nos ensaios de acidose metabólica e n=5 por grupo na acidose respiratória, p> 0,05). CONCLUSÃO: A acidose metabólica causa aumento de abundância de proteínas na superfície da membrana apical, em níveis superiores aos vistos anteriormente em proteínas totais. Na acidose respiratória, apesar de termos observado tendência a aumento de NHE3 na superfície, esse aumento não foi significativo, mantendo o padrão de não alteração do NHE3 anteriormente observado. A acidose respiratória severa não modifica a atividade do promotor do NHE3 em ambos os segmentos testados, o que repete os efeitos anteriormente vistos com a acidose respiratória branda. A acidose metabólica branda repete a ausência de modificação da acidose metabólica severa sobre o segmento menor, porém não repete o aumento no segmento maior
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- Título: Resumos
- Conference titles: Reunião Anual da Federação de Sociedades de Biologia Experimental
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ABNT
SILVA, P. H. I. e REBOUÇAS, Nancy Amaral. Acidose metabólica e respiratória provocam diferentes efeitos sobre a isoforma 3 do trocador sódio/hidrogênio (NHE3). 2010, Anais.. São Paulo: FeSBE, 2010. . Acesso em: 04 jun. 2025. -
APA
Silva, P. H. I., & Rebouças, N. A. (2010). Acidose metabólica e respiratória provocam diferentes efeitos sobre a isoforma 3 do trocador sódio/hidrogênio (NHE3). In Resumos. São Paulo: FeSBE. -
NLM
Silva PHI, Rebouças NA. Acidose metabólica e respiratória provocam diferentes efeitos sobre a isoforma 3 do trocador sódio/hidrogênio (NHE3). Resumos. 2010 ;[citado 2025 jun. 04 ] -
Vancouver
Silva PHI, Rebouças NA. Acidose metabólica e respiratória provocam diferentes efeitos sobre a isoforma 3 do trocador sódio/hidrogênio (NHE3). Resumos. 2010 ;[citado 2025 jun. 04 ] - Modulação transcricional do gene da isoforma 3 do permutador Na+/H+ (NHE3) nas acidoses metabólica e respiratória
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