Rapid detection of bovine coronavirus by a semi-nested RT-PCR (2009)
- Authors:
- USP affiliated authors: SILVA, SHEILA OLIVEIRA DE SOUZA - FMVZ ; RICHTZENHAIN, LEONARDO JOSÉ - FMVZ ; BRANDÃO, PAULO EDUARDO - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- DOI: 10.1590/S0100-736X2009001100001
- Subjects: BIOLOGIA MOLECULAR; BOVINOS; CORONAVIRUS; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE; VIROLOGIA VETERINÁRIA
- Language: Inglês
- Abstract: O Coronavírus bovino (BCoV) pertence ao grupo 2 do gênero Coronavirus (Nidovirales: Coronaviridae) e é agente causador de enterites tanto em bezerros como em bovinos adultos, bem como de doença respiratória em bezerros. O presente estudo teve por objetivo desenvolver uma semi-nested RT-PCR para a detecção do BCoV com base em seqüências representativas e recentes do gene do nucleocapsídeo, região conservada do genoma dos coronavírus. Três primers foram desenhados, a primeira amplificação com um fragmento esperado de 463pb e a segunda (semi-nested) com um fragmento esperado de 306pb. A sensibilidade analítica foi determinada pela diluição do BCoV cepa Kakegawa (título HA: 256) na base de 10 em água ultra-pura tratada com DEPC, em soro fetal bovino (SFB) e em uma suspensão fecal negativa para o BCoV, onde foram encontrados resultados positivos até a diluição de 10-2, 10-3 e 10-7, respectivamente. Este resultado sugere que a quantidade total de RNA na amostra influencia na precipitaçãodos pellets pelo método de extração utilizado. Quando se utiliza amostra fecal, a grande quantidade de RNA total funciona como carreadora do RNA do BCoV, demonstrando elevada sensibilidade analítica e ausência de possíveis substâncias inibidoras da PCR. O protocolo final da semi-nested RT-PCR foi aplicado a 25 amostras fecais de vacas adultas, previamente avaliadas por uma nested RT-PCR RdRp utilizada como teste de referência, resultando em 20 e 17 amostras positivas para oprimeiro e segundo teste, respectivamente. Os resultados dos dois sistema de diagnóstico apresentaram concordância substancial (kappa: 0,694). A elevada sensibilidade e especificidade do novo método proposto e o fato de que os primers foram desenhados baseados em sequências atuais do BCoV, oferecem bases para o diagnóstico mais acurado de infecções causadas pelo BCoV, assim como para novas perspectivas em protocolos de detecção de outros Coronavírus de ) importância tanto em saninade animal quanto em saúde pública
- Imprenta:
- Publisher place: Rio de Janeiro
- Date published: 2009
- Source:
- Título: Pesquisa Veterinária Brasileira
- ISSN: 0100-736X
- Volume/Número/Paginação/Ano: v. 29, n, 11, p. 869-873, 2009
- Status:
- Artigo publicado em periódico de acesso aberto (Gold Open Access)
- Versão do Documento:
- Versão publicada (Published version)
- Acessar versão aberta:
-
ABNT
ASANO, Karen Miyuki et al. Rapid detection of bovine coronavirus by a semi-nested RT-PCR. Pesquisa Veterinária Brasileira, v. 29, p. 869-873, 2009Tradução . . Disponível em: https://doi.org/10.1590/S0100-736X2009001100001. Acesso em: 31 mar. 2026. -
APA
Asano, K. M., Souza, S. P. de, Silva, S. O. de S., Richtzenhain, L. J., & Brandão, P. E. (2009). Rapid detection of bovine coronavirus by a semi-nested RT-PCR. Pesquisa Veterinária Brasileira, 29, 869-873. doi:10.1590/S0100-736X2009001100001 -
NLM
Asano KM, Souza SP de, Silva SO de S, Richtzenhain LJ, Brandão PE. Rapid detection of bovine coronavirus by a semi-nested RT-PCR [Internet]. Pesquisa Veterinária Brasileira. 2009 ; 29 869-873.[citado 2026 mar. 31 ] Available from: https://doi.org/10.1590/S0100-736X2009001100001 -
Vancouver
Asano KM, Souza SP de, Silva SO de S, Richtzenhain LJ, Brandão PE. Rapid detection of bovine coronavirus by a semi-nested RT-PCR [Internet]. Pesquisa Veterinária Brasileira. 2009 ; 29 869-873.[citado 2026 mar. 31 ] Available from: https://doi.org/10.1590/S0100-736X2009001100001 - Canine coronavirus (CCoV), a neglected pathogen: molecular diversity of S, M, N and 3b genes
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