Clonagem e expressão do gene da alfa-amilase em linhagem laboratorial de Saccharomyces cerevisiae através do sistema "delta-integração" (2009)
- Authors:
- Autor USP: VICENTE, ELISABETE JOSE - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: MICROBIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: O Brasil é reconhecido mundialmente pela produção do etanol combustível, sendo seu principal substrato a cana-de-açúcar. Estudos recentes apontam a mandioca como uma das melhores fontes renováveis para a produção de etanol, por consumir menos energia no processo agroindustrial e possuir um sistema de cultivo mais sustentável, quando comparada à cana ou ao milho (Salla, 2008). Saccharomyces cerevisiae é reconhecidamente o organismo mais utilizado no processo industrial de fermentação, porém esta levedura não possui a capacidade de hidrolisar moléculas de amido. Visando a obtenção de clones recombinantes com esta capacidade, genes codificadores de enzimas amilolíticas vêm sendo clonados nesta levedura. O ojetivo deste trabalho foi clonar e expressar o cassete de expressão do gene da ?-amilase de B. subtilis em S. cerevisiae, empregando o sistema delta-integração (Gerra et al., 2005). O cassete de expressão da ?-amilase com o promotor constitutivo do gene da álcool-desidrogenase ADH1 foi isolado do plasmídeo pAA3 (Moraes, 1995), empregando-se a endonuclease BamHI e, em seguida, inserido no vetor pGEMT-Easy?, responsável pelo sistema delta-integração. Esta estratégia permitiu a inserção de múltiplas cópias do cassete de expressão no genoma da levedura, que foram integradas por homologia nos sítios do elemento (?) do transposon Ty1. Para a confirmação da integração, os transformantes foram semeados em meio sólido YPDA (0,5% de amido) e foiobservada a formação de halos de amilolise quando as colônias foram submetidas ao vapor de iodo. Foram isolados inúmeros clones recombinantes, desses 104 foram analisados quanto à degradação do amido no meio, sendo encontrado um clone que expressa o gene da ?-amilase. Assim esta é mais uma grande ferramenta que poderá ser empregada para a otimização do processo de produção do etanol a partir de substratos amiláceos.
- Imprenta:
- Publisher: Sociedade Brasileira de Microbiologia
- Publisher place: Porto de Galinhas
- Date published: 2009
- Source:
- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Congresso Brasileiro de Microbiologia
-
ABNT
CARVALHO, F. S. et al. Clonagem e expressão do gene da alfa-amilase em linhagem laboratorial de Saccharomyces cerevisiae através do sistema "delta-integração". 2009, Anais.. Porto de Galinhas: Sociedade Brasileira de Microbiologia, 2009. . Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Carvalho, F. S., Dalmolin, K. P. P., Monteiro, A. R. S., & Vicente, E. J. (2009). Clonagem e expressão do gene da alfa-amilase em linhagem laboratorial de Saccharomyces cerevisiae através do sistema "delta-integração". In Resumos. Porto de Galinhas: Sociedade Brasileira de Microbiologia. -
NLM
Carvalho FS, Dalmolin KPP, Monteiro ARS, Vicente EJ. Clonagem e expressão do gene da alfa-amilase em linhagem laboratorial de Saccharomyces cerevisiae através do sistema "delta-integração". Resumos. 2009 ;[citado 2024 abr. 19 ] -
Vancouver
Carvalho FS, Dalmolin KPP, Monteiro ARS, Vicente EJ. Clonagem e expressão do gene da alfa-amilase em linhagem laboratorial de Saccharomyces cerevisiae através do sistema "delta-integração". Resumos. 2009 ;[citado 2024 abr. 19 ] - Clones recombinantes retrotransformantes obtidos em linhagens de leveduras Saccharomyces cerevisiae transformadas com plasmídio bifuncional PGTY-glico
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