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Caracterização da proteína anônima relacionada à trombospondina 2 (TRAP 2) do protozoário Neospora caninum no processo de invasão celular (2009)

  • Authors:
  • Autor USP: PEREIRA, LUIZ MIGUEL - FCFRP
  • Unidade: FCFRP
  • Sigla do Departamento: 601
  • Subjects: NEOSPORA CANINUM; PARASITOLOGIA; APICOMPLEXA
  • Language: Português
  • Abstract: Neospora caninum é um protozoário Apicomplexa, parasita intracelular obrigatório que possui o cão como hospedeiro definitivo e principalmente os bovinos como hospedeiros intermediários, causando nos primeiros encefalopatia e nos últimos abortos com perda da fertilidade, o que acarreta prejuízos significativos na pecuária mundial. O parasita necessita multiplicar de modo intra-celular, utilizando a descarga de proteínas contidas em organelas filo-específicas, como as micronemas que liberam proteínas relacionadas a adesão e invasão ativa, além das roptrias e os grânulos densos. Este trabalho foi realizado sobre um tipo de proteína micronêmica denominada proteína Anônima Relacionada à Trombospondina (TRAP), relacionada à adesão e ligação com o motor intracelular, responsável pelo processo ativo de invasão. TRAP 1 já havia sido descrita pela literatura e o objetivo deste trabalho foi a caracterização molecular do até então desconhecido homólogo TRAP 2, com expressão de suas formas recombinantes e o uso de seus respectivos anti-soros para ensaios funcionais e localização da proteína nativa. Com base em banco de dados de ESTs e genômicos de N. caninum e fazendo uso de RLM-RACE (Reação mediada por RNA ligase- amplificação rápida dos términos de cDNA-RNA,) foi possível a obtenção da sequencia completa do gene NcTrap 2, que possui quatro éxons separados por três íntrons. Sua forma protéica, como seu homológo, é formado por um peptídeo sinal, uma integrina, cincotrombospondinas, uma região transmembrana e a cauda citoplasmática. A integrina e as trombospondinas são motivos relacionados à adesão para início do processo invasivo e foram os alvos deste trabalho. Foram expressos dois recombinantes a partir deste cerne funcional (integrina e trombospondinas), com 52 e 78 kDa, e seus respectivos anti-soros foram obtidos. Estes foram utilizados em western blots 1 D e 2D para localização da forma nativa de NcTRAP 2 de ) aproximadamente 80 kDa no extrato total e de sua forma processada no ESA (extrato secretado, simulando o momento invasivo do taquizoíta) com 70 kDa. O soro contra o recombinante 1 teve a capacidade de inibir o processo invasivo em valores de 53 a 61 %, dependendo do método utilizado (contagem manual ou real time PCR). NcTRAP 2 foi encontrada no complexo apical parasitário do taquizoíta por imunofluorêscencia confocal, evidenciando sua provável localização nas micronemas. A nova molécula, NcTRAP 2 possui características que a diferencia de NcTRAP 1 o suficiente para ser considerada homóloga. O soro contra sua forma recombinante detectou as formas nativas integral e secretada e demonstrou que NcTRAP 2 possui capacidade de inibir a invasão dos taquizoítas, o que a torna um interessante alvo vacinal
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 28.04.2009
  • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      PEREIRA, Luiz Miguel; NATSUI, Ana Patrícia Yatsuda. Caracterização da proteína anônima relacionada à trombospondina 2 (TRAP 2) do protozoário Neospora caninum no processo de invasão celular. 2009.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-06052009-094059/ >.
    • APA

      Pereira, L. M., & Natsui, A. P. Y. (2009). Caracterização da proteína anônima relacionada à trombospondina 2 (TRAP 2) do protozoário Neospora caninum no processo de invasão celular. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-06052009-094059/
    • NLM

      Pereira LM, Natsui APY. Caracterização da proteína anônima relacionada à trombospondina 2 (TRAP 2) do protozoário Neospora caninum no processo de invasão celular [Internet]. 2009 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-06052009-094059/
    • Vancouver

      Pereira LM, Natsui APY. Caracterização da proteína anônima relacionada à trombospondina 2 (TRAP 2) do protozoário Neospora caninum no processo de invasão celular [Internet]. 2009 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-06052009-094059/


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