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Estudo do complexo celulolítico do fungo termófilo Scytalidium thermophilum: produção, caracterização bioquímica e purificação de uma endoglucanase (2009)

  • Authors:
  • Autor USP: SILVA, JEAN CARLOS RODRIGUES DA - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RBI
  • Subjects: FUNGOS TERMÓFILOS; FUNGOS CELULOLÍTICOS; ENZIMOLOGIA; BIOQUÍMICA MICROBIANA
  • Language: Português
  • Abstract: A celulose é o mais abundante recurso natural biológico renovável e sua hidrólise é catalisada por celulases. Estas enzimas são classificadas como endoglucanases, exoglucanases e ß-glucosidases, e agem de forma diferente, hidrolisando ligações glicosídicas do tipo ß1?4. Endoglucanases hidrolisam aleatoriamente ligações glicosídicas acessíveis das cadeias de celulose produzindo novas cadeias terminais; as exoglucanases clivam progressivamente cadeias de celulose a partir de suas extremidades, liberando celobiose solúvel; e as ß-glucosidases hidrolisam celobiose à glicose. Celulases são produzidas por um grande número fungos e de bactérias. Estas enzimas são aplicadas em indústrias de detergente, amido, suco de fruta, papel, alimento e cerveja. Celulases podem ser usadas diretamente na preparação dos produtos comerciais ou posteriormente, no tratamento dos resíduos. Nos últimos cinco anos, há um interesse crescente na produção de etanol a partir da biomassa lignocelulósica. O objetivo deste trabalho foi estudar a produção e as propriedades bioquímicas das celulases do fungo termófilo Scytalidium thermophilum. A maior produção de atividade da celulase ocorreu após de 72 h de crescimento, em meio de cultura contendo substratos celulósicos. As condições ótimas aparentes para atividades da celulase foram determinadas no filtrado bruto. As condições ótimas de pH e temperatura foram 4,0, 6,0, 5,0 e 55°C, 60°C e 55°C, para atividades de CMCase,avicelase e FPase, respectivamente. Interessantemente, as celulases de Scytalidium no filtrado bruto não exibiram significativa inibição na presença de glicose e celobiose no meio reacional. Na tentativa de purificação das celulases, foi utilizado um procedimento envolvendo a precipitação por sulfato do amônio e cromatografia em CM-Fractogel. Uma endoglucanase (CMcase) foi purificada por este procedimento, como indicado por análises de PAGE e SDS-PAGE. A enzima foi purificada 13,76 vezes, a preparação final exibiu uma atividade específica de 76,38 U/mg de proteína e um rendimento de 16%. As massas moleculares aparentes determinadas por SDS-PAGE e por filtração em gel foram 47 kDa e 44 kDa, respectivamente. As condições ótimas aparentes de pH e temperatura foram 4,5 e 60°C, respectivamente. A enzima purificada hidrolisou eficientemente CMC e exibiu a pouca especificidade para avicel, papel de filtro, o amido e celobiose. Os íons mercúrio, cobre e alumínio inibiram a CMCase purificada, enquanto que o ß-mercaptoetanol e o cobalto estimularam a enzima. As meias-vidas da enzima quando incubada a 60°C em meio aquoso ou a 70 °C em meio contendo 1 % de CMC foram de 23 minutos e 46 minutos, respectivamente. A enzima exibiu 'K IND.m' e 'V IND.máx' para o CMC de 0,8% (p/v) e 122,5 U/mg de proteína, respectivamente. Os resultados encontrados sugerem que a endoglucanase de Scytalidium estudada tem potencial para aplicações biotecnológicas em processos desacarificação
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 02.03.2009

  • How to cite
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    • ABNT

      SILVA, Jean Carlos Rodrigues da; JORGE, João Atílio. Estudo do complexo celulolítico do fungo termófilo Scytalidium thermophilum: produção, caracterização bioquímica e purificação de uma endoglucanase. 2009.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009.
    • APA

      Silva, J. C. R. da, & Jorge, J. A. (2009). Estudo do complexo celulolítico do fungo termófilo Scytalidium thermophilum: produção, caracterização bioquímica e purificação de uma endoglucanase. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Silva JCR da, Jorge JA. Estudo do complexo celulolítico do fungo termófilo Scytalidium thermophilum: produção, caracterização bioquímica e purificação de uma endoglucanase. 2009 ;
    • Vancouver

      Silva JCR da, Jorge JA. Estudo do complexo celulolítico do fungo termófilo Scytalidium thermophilum: produção, caracterização bioquímica e purificação de uma endoglucanase. 2009 ;


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