Identificação de elementos regulatórios essenciais da região promotora do gene do permutador NA+/H+ (NHE3) (2008)
- Authors:
- Autor USP: REBOUCAS, NANCY AMARAL - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: FISIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Objetivos O objetivo deste trabalho é identificar os elementos essenciais para a regulação positiva e negativa da transcrição do gene NHE3 de rato na região flanqueadora 5´ próxima ao sítio de início de transcrição. Métodos e resultados Segmentos da região flanqueadora 5´ do gene NHE3 de rato foram obtidos por PCR e inseridos no plasmídeo pGL3-basic, que codifica para o gene repórter Firefly lucíferase. Os seguintes fragmentos foram analisados 1) -157 a +31; 2) -152 a +55; 3) -85 a +31; 4) -65 a +31; 5) -44 a +31; 6) -33 a +31; 7) -25 a +31; 8) -157 a +35, com deleção do elemento GATA (posição +20 a +23) contido no primeiro exon e 9) -157 a +31 com mutação da base G em C no elemento GATA (CATA). Os plasmídeos recombinantes foram transfectados em células OKP, uma linhagem de túbulos proximais de rim de opossum. A atividade promotora de transcrição de cada segmento foi analisada em comparação com a atividade de luciferase observada com o vetor pGL3-basic não recombinante, sem o promotor de NHE3. Para avaliar a eficiência de transfecção, foi transfectado simultaneamente o vetor pRL-CMV o qual contém o gene repórter Renila luciferase controlado pelo promotor CMV.) A atividade do promotor foi significativamente mais elevada com o constructo -152 a +31 (102,8 ± 20,69 (n=9)) o que já havia sido mostrado em experimentos anteriores em nosso laboratório. Há fortes ativadores entre -152 e -85 e entre -65 e -44; há elementos inibitórios entre -85 e -65. O menorsegmento com atividade promotora significativa foi -44 a +31. O segmento -33 a +31 tem atividade baixa e praticamente igual a -25 a +31. A mutação do elemento GATA na posição +20, trocando G por C, reduz a atividade desse segmento em 6 vezes (20,32 ± 4,079 (n=9)). A deleção total do elemento GATA, no entanto, reduz a atividade desse segmento promotor em apenas 50%. Conclusão Existem elementos inibitórios importantes que parecem modular a atividade do promotor de NHE3 na região entre -85 e -65 (contém os elementos EGR-1 e Sp1); e entre -65 e -44 há elementos estimulatórios, Sp1 e Ap2. Os fatores gerais de transcrição parecem depender do elemento GATA para sua estabilidade e promoção do início de transcrição.
- Imprenta:
- Publisher place: Águas de Lindóia
- Date published: 2008
- Source:
- Título: Programa
- Conference titles: Reunião Anual da Federação de Sociedades de Biologia Experimental - FeSBE
-
ABNT
NERI, Elida Adalgisa e BEZERRA, Camila Nogueira Alves e REBOUÇAS, Nancy Amaral. Identificação de elementos regulatórios essenciais da região promotora do gene do permutador NA+/H+ (NHE3). 2008, Anais.. Águas de Lindóia: Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, 2008. . Acesso em: 17 nov. 2024. -
APA
Neri, E. A., Bezerra, C. N. A., & Rebouças, N. A. (2008). Identificação de elementos regulatórios essenciais da região promotora do gene do permutador NA+/H+ (NHE3). In Programa. Águas de Lindóia: Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo. -
NLM
Neri EA, Bezerra CNA, Rebouças NA. Identificação de elementos regulatórios essenciais da região promotora do gene do permutador NA+/H+ (NHE3). Programa. 2008 ;[citado 2024 nov. 17 ] -
Vancouver
Neri EA, Bezerra CNA, Rebouças NA. Identificação de elementos regulatórios essenciais da região promotora do gene do permutador NA+/H+ (NHE3). Programa. 2008 ;[citado 2024 nov. 17 ] - Modulação transcricional do gene da isoforma 3 do permutador Na+/H+ (NHE3) nas acidoses metabólica e respiratória
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