Efeitos da acidose metabólica e respiratória na regulação da 'isoforma IND. 3' do trocador sódio hidrogênio (NHE3) (2007)
- Authors:
- Autor USP: REBOUCAS, NANCY AMARAL - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: FISIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Objetivo: O NHE3 possui importante função na extrusão de prótons e conseqüente reabsorção de bicarbonato em túbulo proximal renal de mamíferos, relacionando-se diretamente às modificações ocorridas no equilíbrio ácido-base. O objetivo deste trabalho foi verificar se a acidose metabólica e respiratória alteram os níveis de mRNA e proteína-NHE3, bem como a atividade do promotor do gene NHE3. Em breve pretendemos avaliar a meia-vida do mRNA-NHE3 e a atividade do trocador. Métodos e Resultados: Células OKP submetidas a modificações do pH do meio de cultura celular, por adição de ácido fixo (acidose metabólica); aumento da atmosfera de CO2 de 40 mmHg para 80 mmHg(acidose respiratória); ou manutenção do pH em 7,4 (controle) foram lisadas para a extração de RNA total, proteínas ou estudo da atividade do promotor. Após os ensaios de acidose e situação controle de todos os experimentos, pH, [HCO3-] e pCO2 eram avaliados para determinar se as situações fisiológicas estavam adequadas aos distúrbios no equilíbrio ácido-base desejados. A quantificação do mRNA-NHE3 foi realizada pela técnica RT-PCR/PCR em tempo real, utilizando primers específicos para NHE3 e como controle endógeno, primers para ?-actina. Para quantificação de proteína-NHE3 foi realizado immunobloting com anticorpo específico para NHE3 (3H3). A acidose metabólica provocou aumento de 30% na quantidade de mRNA (n=6) e de 120% na quantidade de proteína (n=3) quando comparados à situaçãocontrole (n=6 e n=3, respectivamente). ) A acidose respiratória provocou aumento de 60% no mRNA (n=5), porém não foi verificado aumento significativo na quantidade de proteínas quando comparado ao controle (n=6 e n=3 respectivamente) (p<0,05). Células OKP transfectadas com segmentos do promotor do gene NHE3 foram submetidas às condições acima descritas. Os segmentos utilizados foram clonados no vetor pGL3 que contém o gene repórter Firefly Luciferase. As regiões clonadas compreendem das posições -152 a +55 e de -2095 a +55. Os resultados foram normalizados pela atividade de luciferase em células transfectadas com o vetor pGL3-basic. A acidose metabólica induziu aumento significativo tanto no segmento menor (93%, n=5) quanto no segmento maior (60%, n=6), quando comparados aos seus respectivos controles (n=5 e n=6). A acidose respiratória induziu aumento significativo apenas no segmento menor (52%, n=3), quando comparado ao controle (n=6) (p<0,05). Conclusões: Nossos resultados indicam que a acidose é importante na ativação do NHE3 em diversos níveis moleculares e que possivelmente na região correspondente de -152 a +55 do promotor/gene do NHE3 devem existir elementos responsivos importantes para a resposta à acidose.
- Imprenta:
- Publisher: Federação de Sociedades de Biologia Experimental
- Publisher place: Águas de Lindóia
- Date published: 2007
- Source:
- Título: Programa e Resumos
- Conference titles: Reunião Anual da Federação de Sociedades de Biologia Experimental - FESBE
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ABNT
SILVA, P. H. I. et al. Efeitos da acidose metabólica e respiratória na regulação da 'isoforma IND. 3' do trocador sódio hidrogênio (NHE3). 2007, Anais.. Águas de Lindóia: Federação de Sociedades de Biologia Experimental, 2007. . Acesso em: 20 mar. 2026. -
APA
Silva, P. H. I., Bezerra, C. N. A., Girardi, A. C. C., & Rebouças, N. A. (2007). Efeitos da acidose metabólica e respiratória na regulação da 'isoforma IND. 3' do trocador sódio hidrogênio (NHE3). In Programa e Resumos. Águas de Lindóia: Federação de Sociedades de Biologia Experimental. -
NLM
Silva PHI, Bezerra CNA, Girardi ACC, Rebouças NA. Efeitos da acidose metabólica e respiratória na regulação da 'isoforma IND. 3' do trocador sódio hidrogênio (NHE3). Programa e Resumos. 2007 ;[citado 2026 mar. 20 ] -
Vancouver
Silva PHI, Bezerra CNA, Girardi ACC, Rebouças NA. Efeitos da acidose metabólica e respiratória na regulação da 'isoforma IND. 3' do trocador sódio hidrogênio (NHE3). Programa e Resumos. 2007 ;[citado 2026 mar. 20 ] - Modulation of NHE3 expression by chronic metabolic and respiratory acidosis
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