Expressão, purificação e avaliação da proteína recombinante 'N IND. c'56 de Neospora caninum para o sorodiagnóstico da neosporose bovina pelas técnicas de ELISA e Western-blotting (2007)
- Authors:
- Autor USP: RUIZ, VERA LETTICIE DE AZEVEDO - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- Sigla do Departamento: VPS
- Subjects: PROTEÍNAS RECOMBINANTES; SORODIAGNÓSTICOS; ELISA; WESTERN BLOTTING; NEOSPORA CANINUM; BOVINOS
- Language: Português
- Abstract: O Neospora caninum é um protozoário filogeneticamente relacionado a vários coccídeos de importância em medicina veterinária e humana, além de ser um parasita intracelular obrigatório capaz de causar abortamentos em bovinos e paralisia neuromuscular em cães. O estudo de antígenos e proteínas recombinantes de N. caninum gerou uma série de informações para um melhor diagnóstico e diferenciação deste protozoário e demais agentes a ele relacionados. No presente trabalho, propomos a expressão do clone do gene da proteína interna Nc56 de N. caninum em sistema procarioto (Escherichia coli), para avaliar sua antigenicidade frente a soros de bovinos imunoreativos contra Neospora caninum e Toxoplasma gondii. Para tanto, estabelecemos as condições ideais de expressão da proteína (indução por 4 horas e concentração de L-arabinose de 0,2%) e posteriormente avaliamos duas formas de purificação do produto recombinante (cromatografia de afinidade por metal imobilizado e eluição direta do gel de SDS-PAGE), constatando que a eluição de proteínas recombinantes diretamente do gel de SDS-PAGE mostrou-se o procedimento mais adequado para evitar a presença de proteínas contaminantes advindas do sistema procarioto de expressão. Foi selecionado um painel de soros bovinos (animais de campo), previamente testados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para avaliar sua reatividade para Neospora caninum e Toxoplasma gondii. Utilizamos o soro de um bezerro macho da raçaHolandesa recém-nascido, colhido antes da administração de colostro materno (mãe soronegativa pela RIFI-Nc e RIFI-Tg) como controle negativo. O controle positivo foi obtido do mesmo bezerro após inoculação experimental de taquizoítos viáveis de N. caninum, quando este animal já apresentava seis meses de idade. O ELISA indireto foi realizado com microplacas de poliestireno com 96 cavidades de fundo chato sensibilizadas ) com 10 μg/mL de proteína recombinante purificada Nc56 e apresentou altas densidades ópticas tanto para soros bovinos positivos na RIFI para N. caninum quanto para T. gondii, quando comparadas com a densidade óptica do soro controle negativo. A proteína recombinante purificada e o extrato bruto de proteínas solúveis em tampão desnaturante foram submetidos ao teste de Western-blotting, para avaliação de antigenicidade frente a soros de animais positivos e negativos para N. caninum e T. gondii, previamente testados por RIFI. Os resultados apresentados nas duas técnicas (ELISA e Western-blotting) demonstram que a proteína recombinante purificada Nc56 de N. caninum possui reatividade cruzada entre os dois coccídeos, não se prestando, portanto, para uso em sorodiagnóstico da neosporose.
- Imprenta:
- Data da defesa: 13.04.2007
-
ABNT
RUIZ, Vera Letticie de Azevedo. Expressão, purificação e avaliação da proteína recombinante 'N IND. c'56 de Neospora caninum para o sorodiagnóstico da neosporose bovina pelas técnicas de ELISA e Western-blotting. 2007. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2007. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-25052007-154356/. Acesso em: 28 dez. 2025. -
APA
Ruiz, V. L. de A. (2007). Expressão, purificação e avaliação da proteína recombinante 'N IND. c'56 de Neospora caninum para o sorodiagnóstico da neosporose bovina pelas técnicas de ELISA e Western-blotting (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-25052007-154356/ -
NLM
Ruiz VL de A. Expressão, purificação e avaliação da proteína recombinante 'N IND. c'56 de Neospora caninum para o sorodiagnóstico da neosporose bovina pelas técnicas de ELISA e Western-blotting [Internet]. 2007 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-25052007-154356/ -
Vancouver
Ruiz VL de A. Expressão, purificação e avaliação da proteína recombinante 'N IND. c'56 de Neospora caninum para o sorodiagnóstico da neosporose bovina pelas técnicas de ELISA e Western-blotting [Internet]. 2007 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-25052007-154356/ - Isolation and molecular characterization of porcine circovirus types 2A and 2B
- Segurança de alimentos extrusados para cães e gatos
- Implementation of histopathological techniques and transmission electron microscopy for research of Mycoplasma hyopneumoniae in swine
- Examination of diarrheic and healthy piglets' feces by transmission electron microscopy technique
- Effect of bacterial agents of porcine respiratory disease complex on productive indices and slaughter weight
- Pesquisa da ocorrência de circovírus suíno e de possíveis co-infecções com parvovírus suíno em oito estados brasileiros
- Evolução da disciplina "Epidemiologia e Diagnóstico de Doenças de Suídeos" entre 2012 a 2022
- Caracterização de potencialidades e possíveis soluções nos aspectos de sanidade, tecnificação e bem-estar animal da suinocultura paulista
- Micoplasma hyopneumoniae associado ao circovírus suíno tipo 2 em plantéis não vacinados para micoplasmose
- Inovação farmacêutica veterinária no Brasil
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
