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Isolamento e caracterização bioquímica e funcional de L-aminoácido oxidase do veneno de Bothrops atrox (2007)

  • Authors:
  • USP affiliated author: ALVES, RAQUEL DE MELO - FCFRP
  • School: FCFRP
  • Sigla do Departamento: S/D
  • Subjects: SERPENTES; VENENOS DE ORIGEM ANIMAL; CITOTOXINAS (ATIVIDADE); APOPTOSE
  • Language: Português
  • Abstract: Os venenos de serpentes são ricos em proteínas, enzimas e peptídeos biologicamente ativos. Diversas enzimas tais como fosfolipases ‘A IND. 2’ (‘PLA IND. 2S’), metalproteases (:MP), L-aminoácido oxidases (LAAOs.) são responsáveis pelo quadro clínico do envenenamento ofidico. Atualmente, o isolamento e a caracterização funcional e estrutural destas enzimas têm auxiliado na compreensão do mecanismo de ação destas toxinas e nas formas alternativas de tratamento. Além disso, estas enzimas se tornaram valiosas ferramentas de aplicação biotecnológica, na busca de novos fármacos de interesse na clínica médica. O objetivo deste trabalho foi isolar e caracterizar bioquímica e funcionalmente a L-aminoácido oxidase do veneno de Bothrops atrox. O isolamento da LAAO de B. atrox (LAAOBatrox) envolveu três etapas cromatográficas: a exclusão molecular em Sephadex G- 75,- troca iônica em ES-502N u1ilizando CLAE e, por último, a cromatografia de afinidade com uso da Lentil-Lectina, conferindo um alto grau de pureza à proteína confirmado por SDS-P AGE., Após a caracterização bioquímica, a LAAOBatrox demonstrou ser uma glicoproteína com 12% de açúcar, massa molecular relativa de 67.000 e pI de 4,-4 confirmando seu caráter ácido pela composição em aminoácidos, predominando Asx (Ácido aspártico ou asparagina) e Glx (Ácido glutâmico ou glutamina). LAAOBatrox apresentou especificidade de substrato para L-Met e L~Leu- Com o seqüenciamento dos peptídeos trípticos internos e em comparação com asLAAOs de outros venenos, a LAAOBatrox apresentou homologia. de 100% com LAAOs isoladas de B.. moojeni e B.. jararacussu e apresentou sequenciamento N-terminal de ADDN-NPLEE-NIRRDD que é homólogo ao das LAAOs já descritas. ALAAOBatrox apresentou atividade edematogênica moderada quando comparada ao veneno bruto, atividade coagulante baixa sobre o plasma humano citratado, atividade de agregação plaquetária sendo que 25 Jlg/mL foi capaz- de agregar aproximadamente 100% de plaquetas, onde o efeito obtido pela proteína pode ser devido à liberação de ‘H IND. 2’‘O IND. 2’,- sendo que a catalase foi adicionada ao meio tratado com LAAOBatrox e o efeito de agregação plaquetária obtido foi próximo à 0%. LAAOBatlrox apresentou efeito citotóxico sobre diferentes linhagens tumorais: B16F1O onde as células apresentaram 70% de morte por apoptose e PC12 que apresentaram uma viabilidade celular de 20% após o tratamento com a enzima. LAAOBatrox não apresentou efeito citotóxico signifICativo sobre células normais. Portanto, a LAAOBatrox consiste de uma enzima multifuncional que poderá servir como ferramenta para investigação dos processos celulares que estão envolvidos no envenenamento
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 16.03.2007
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    • ABNT

      ALVES, Raquel de Melo; SAMPAIO, Suely Vilela. Isolamento e caracterização bioquímica e funcional de L-aminoácido oxidase do veneno de Bothrops atrox. 2007.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2007. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-31072009-083151/?&lang=pt-br >.
    • APA

      Alves, R. de M., & Sampaio, S. V. (2007). Isolamento e caracterização bioquímica e funcional de L-aminoácido oxidase do veneno de Bothrops atrox. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-31072009-083151/?&lang=pt-br
    • NLM

      Alves R de M, Sampaio SV. Isolamento e caracterização bioquímica e funcional de L-aminoácido oxidase do veneno de Bothrops atrox [Internet]. 2007 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-31072009-083151/?&lang=pt-br
    • Vancouver

      Alves R de M, Sampaio SV. Isolamento e caracterização bioquímica e funcional de L-aminoácido oxidase do veneno de Bothrops atrox [Internet]. 2007 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-31072009-083151/?&lang=pt-br


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