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Caracterização cinética da ('Na POT. +', 'K POT. +')-ATPase da fração microsomal do tecido branquial do siri Callinectes ornatus ordway, 1863 (Crustácea, Portunidae) (2007)

  • Authors:
  • Autor USP: GARÇON, DANIELA PEREIRA - FFCLRP
  • Unidade: FFCLRP
  • Sigla do Departamento: 593
  • Subjects: SIRI; CRUSTÁCEOS; ENZIMOLOGIA; BIOQUÍMICA
  • Language: Português
  • Abstract: A (‘Na POT. +’,’K POT. +’)-ATPase presente no tecido branquial dos crustáceos osmorreguladores é um componente essencial de seu sistema de regulação iônica e osmótica. Esta enzima também apresenta um papel relevante no processo de excreção ativa de ‘N’H IND. 4’ POT. +’ através do tecido branquial dos crustáceos. Uma fração microsomal rica em (‘Na POT. +’,’K POT. +’)-ATPase foi preparada por centrifugação diferencial a partir de um homogeneizado do tecido branquial de Callinectes ornatus. A centrifugação em gradiente de sacarose revelou a presença de um unico pico de proteina com atividade ATPase, mas a eletroforese em gel de poliacrilamida em condições desnaturantes revelou a presença de várias bandas protéicas. O uso do anticolpo monoclonal ‘alfa’5 contra a subunidade ‘alfa’ da (‘Na POT. +’,’K POT. +’)-ATPase, revelou a presença de uma única banda proteica de 110 kDa com atividade (‘Na POT. +’,’K POT. +’)-ATPase. A (‘Na POT. +’,’K POT. +’)-ATPase hidrolisou o PNPP (V= 52,0 ± 2,0 U/mg e ‘K IND. 0,5’ = 1,1 ± 0,1 mM) através de interações sítio-sítio (‘n IND. H’= 1,6). A modulação da enzima pelos íons magnésio (V= 52,3 ± 1,3 U/mg e ‘K IND. 0,5’ = 1,1 ± 0,05 mM), potássio (V= 51,4 ± 1,5 U/mg e ‘K IND. 0,5’ = 2,3 ± 0,1 mM) e amônio (V= 56,7 ± 2,6 U/mg e ‘K IND. 0,5’ = 9,8 ± 0,4 mM) ocorreu através de interações sítio-sítio. Os íons sódio atuaram como inibidores da atividade ‘K POT. +’-fosfatase da enzima (Ki= 1,7 ± 0,1 mM) e a ouabaína inibiu cerca de 80% a atividadePNPPase independentemente da presença de íons amônio. A (‘Na POT. +’,’K POT. +’)-ATPase hidrolisou o ATP de acordo com cinética de Michelis-Menten, com ‘K IND. M’= 0,16 ± 0,01 mM e V= 116,3 ± 5,6 U/mg, enquanto a modulação da atividade da enzima pelos íons magnésio (V= 111,0 ± 5,4 U/mg e ‘K IND. 0,5’= 0,54 ± 0,03 mM), sódio (V= 110,6 ± 5,3 U/mg e ‘K IND. 0,5’= 6,3 ± 0,3 mM), potássio (V= 116,0 ± 5,5 U/mg e ‘K IND. 0,5’= 1,5 ± 0,1 mM) e amônio ) (V= 173,3 ± 5,4 U/mg e ‘K IND. 0,5’= 5,4 ± 0,3 mM) ocorreram através de interações sítio-sítio. Também foi observado que na presença de concentrações crescentes de íons amônio, a estimulação da atividade (‘Na POT. +’,’K POT. +’)-ATPase pelo íons potássio acarretou um aumento de 50% na atividade específica da enzima. A ouabaína inibiu cerca de 86% a atividade (‘Na POT. +’,’K POT. +’)-ATPase com Ki= 74,5 ‘mü’M, sugerindo a presença de 14% de fosfatases e/ou outras ATPase contaminantes. Este é o primeiro trabalho onde se observa uma estimulação sinergística da atividade K-fosfatase da (‘Na POT. +’,’K POT. +’)-ATPase de crustáceo pelos íons potássio e amônio. Os resultados cinéticos obtidos para a (‘Na POT. +’,’K POT. +’)-ATPase branquial de Callinectes ornatus, analisados em conjunto com os já descritos para outras espécies de crustáceos poderão abrir novas perspectivas em relação ao papel dessa enzima na adaptação fisiológica-bioquímica, bem como para a sobrevivência desses animais em diferentes ambientes
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 09.03.2007
  • Acesso à fonte
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    • ABNT

      GARÇON, Daniela Pereira; LEONE, Francisco de Assis. Caracterização cinética da ('Na POT. +', 'K POT. +')-ATPase da fração microsomal do tecido branquial do siri Callinectes ornatus ordway, 1863 (Crustácea, Portunidae). 2007.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2007. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-24042007-154908/ >.
    • APA

      Garçon, D. P., & Leone, F. de A. (2007). Caracterização cinética da ('Na POT. +', 'K POT. +')-ATPase da fração microsomal do tecido branquial do siri Callinectes ornatus ordway, 1863 (Crustácea, Portunidae). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-24042007-154908/
    • NLM

      Garçon DP, Leone F de A. Caracterização cinética da ('Na POT. +', 'K POT. +')-ATPase da fração microsomal do tecido branquial do siri Callinectes ornatus ordway, 1863 (Crustácea, Portunidae) [Internet]. 2007 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-24042007-154908/
    • Vancouver

      Garçon DP, Leone F de A. Caracterização cinética da ('Na POT. +', 'K POT. +')-ATPase da fração microsomal do tecido branquial do siri Callinectes ornatus ordway, 1863 (Crustácea, Portunidae) [Internet]. 2007 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-24042007-154908/


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