Caracterização cinética da ('Na POT. +', 'K POT. +')-ATPase da fração microsomal do tecido branquial do siri Callinectes ornatus ordway, 1863 (Crustácea, Portunidae) (2007)
- Authors:
- Autor USP: GARÇON, DANIELA PEREIRA - FFCLRP
- Unidade: FFCLRP
- Sigla do Departamento: 593
- Subjects: SIRI; CRUSTÁCEOS; ENZIMOLOGIA; BIOQUÍMICA
- Language: Português
- Abstract: A (Na POT. +,K POT. +)-ATPase presente no tecido branquial dos crustáceos osmorreguladores é um componente essencial de seu sistema de regulação iônica e osmótica. Esta enzima também apresenta um papel relevante no processo de excreção ativa de NH IND. 4 POT. + através do tecido branquial dos crustáceos. Uma fração microsomal rica em (Na POT. +,K POT. +)-ATPase foi preparada por centrifugação diferencial a partir de um homogeneizado do tecido branquial de Callinectes ornatus. A centrifugação em gradiente de sacarose revelou a presença de um unico pico de proteina com atividade ATPase, mas a eletroforese em gel de poliacrilamida em condições desnaturantes revelou a presença de várias bandas protéicas. O uso do anticolpo monoclonal alfa5 contra a subunidade alfa da (Na POT. +,K POT. +)-ATPase, revelou a presença de uma única banda proteica de 110 kDa com atividade (Na POT. +,K POT. +)-ATPase. A (Na POT. +,K POT. +)-ATPase hidrolisou o PNPP (V= 52,0 ± 2,0 U/mg e K IND. 0,5 = 1,1 ± 0,1 mM) através de interações sítio-sítio (n IND. H= 1,6). A modulação da enzima pelos íons magnésio (V= 52,3 ± 1,3 U/mg e K IND. 0,5 = 1,1 ± 0,05 mM), potássio (V= 51,4 ± 1,5 U/mg e K IND. 0,5 = 2,3 ± 0,1 mM) e amônio (V= 56,7 ± 2,6 U/mg e K IND. 0,5 = 9,8 ± 0,4 mM) ocorreu através de interações sítio-sítio. Os íons sódio atuaram como inibidores da atividade K POT. +-fosfatase da enzima (Ki= 1,7 ± 0,1 mM) e a ouabaína inibiu cerca de 80% a atividadePNPPase independentemente da presença de íons amônio. A (Na POT. +,K POT. +)-ATPase hidrolisou o ATP de acordo com cinética de Michelis-Menten, com K IND. M= 0,16 ± 0,01 mM e V= 116,3 ± 5,6 U/mg, enquanto a modulação da atividade da enzima pelos íons magnésio (V= 111,0 ± 5,4 U/mg e K IND. 0,5= 0,54 ± 0,03 mM), sódio (V= 110,6 ± 5,3 U/mg e K IND. 0,5= 6,3 ± 0,3 mM), potássio (V= 116,0 ± 5,5 U/mg e K IND. 0,5= 1,5 ± 0,1 mM) e amônio ) (V= 173,3 ± 5,4 U/mg e K IND. 0,5= 5,4 ± 0,3 mM) ocorreram através de interações sítio-sítio. Também foi observado que na presença de concentrações crescentes de íons amônio, a estimulação da atividade (Na POT. +,K POT. +)-ATPase pelo íons potássio acarretou um aumento de 50% na atividade específica da enzima. A ouabaína inibiu cerca de 86% a atividade (Na POT. +,K POT. +)-ATPase com Ki= 74,5 müM, sugerindo a presença de 14% de fosfatases e/ou outras ATPase contaminantes. Este é o primeiro trabalho onde se observa uma estimulação sinergística da atividade K-fosfatase da (Na POT. +,K POT. +)-ATPase de crustáceo pelos íons potássio e amônio. Os resultados cinéticos obtidos para a (Na POT. +,K POT. +)-ATPase branquial de Callinectes ornatus, analisados em conjunto com os já descritos para outras espécies de crustáceos poderão abrir novas perspectivas em relação ao papel dessa enzima na adaptação fisiológica-bioquímica, bem como para a sobrevivência desses animais em diferentes ambientes
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2007
- Data da defesa: 09.03.2007
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ABNT
GARÇON, Daniela Pereira. Caracterização cinética da ('Na POT. +', 'K POT. +')-ATPase da fração microsomal do tecido branquial do siri Callinectes ornatus ordway, 1863 (Crustácea, Portunidae). 2007. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2007. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-24042007-154908/. Acesso em: 29 mar. 2024. -
APA
Garçon, D. P. (2007). Caracterização cinética da ('Na POT. +', 'K POT. +')-ATPase da fração microsomal do tecido branquial do siri Callinectes ornatus ordway, 1863 (Crustácea, Portunidae) (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-24042007-154908/ -
NLM
Garçon DP. Caracterização cinética da ('Na POT. +', 'K POT. +')-ATPase da fração microsomal do tecido branquial do siri Callinectes ornatus ordway, 1863 (Crustácea, Portunidae) [Internet]. 2007 ;[citado 2024 mar. 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-24042007-154908/ -
Vancouver
Garçon DP. Caracterização cinética da ('Na POT. +', 'K POT. +')-ATPase da fração microsomal do tecido branquial do siri Callinectes ornatus ordway, 1863 (Crustácea, Portunidae) [Internet]. 2007 ;[citado 2024 mar. 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-24042007-154908/ - (Na+,K+)-ATPase branquial e a osmorregulação em crustáceos: efeito da salinidade na expressão e características cinéticas da wnzima de Callinectes ornatus Ordway, 1863 (Crustacea, Portunidae)
- Short- and long-term salinity challenge, osmoregulatory ability, and (Na+, K+)-ATPase kinetics and α-subunit mRNA expression in the gills of the thinstripe hermit crab Clibanarius symmetricus (Anomura, Diogenidae)
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