Caracterização parcial do gene EcR na glândula salivar de Bradysia hygida (Diptera, Sciaridae) (2006)
- Authors:
- Autor USP: SILVA, JULIANA APARECIDA CANDIDO DA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: GLÂNDULAS SALIVARES; EXPRESSÃO GÊNICA (CONTROLE); CITOLOGIA; BIOLOGIA MOLECULAR
- Language: Português
- Abstract: Em Bradysia hygida, a glândula salivar é formada por três regiões morfologicamente distintas, denominadas S1, S2 e S3. No final do 4° estágio larval, nas regiões S1 e S3, ocorre amplificação gênica em cerca de oito sítios cromossômicos. Este processo é disparado pelo hormônio 20-OH ecdisona (20E) e resulta na formação dos putes de DNA. Os genes amplificados são ativados em dois grupos distintos, sendo a ativação do primeiro grupo dependente de altos níveis de 20E, enquanto a ativação do segundo grupo requer níveis muito baixos do hormônio. Deste modo, glândulas salivares de Bradysia hygida constituem um interessante modelo biológico para estudar as funções de hormônio esteróide, e seus receptores, no processo da amplificação gênica e controle da atividade dos genes amplificados. Em nosso laboratório, foram detectados dois transcritos para o gene BhEcR (6,5 and 1,3 kb) na glândula salivar. Neste trabalho, foram clonados e parcialmente caracterizados cDNAs dos dois transcritos. O transcrito menor e notada mente o de maior interesse, além de seu tamanho pequeno, ele codifica uma pequena proteína que possui o domínio ligante de hormõnio (LBD) em uma posição nunca descrita em outros receptores para esteróide: em relação - a extremidade N terminal da proteína, do domínio LBD precede o domínio ligante de DNA (DBD). O cDNA do transcrito maior (6,5 kb), que inclui parte do domínio A/B, os domínios DBD e O inteiros e parte do domínio LBO, nesta ordem, foi cio nado em vetorde expressão. A proteína de fusão contendo parte do BhEcR (BhEcR 'AB POT. 1'/'LBD POT. 31'), foi expressa em Escherichia calí, cepa JM109, em diferentes condições. Coelhos foram injetados com a proteína BhEcR 'AB POT. 1'/'LBD POT. 31' purificada para a produção de anticorpos policlonais. Os anticorpos policlonais foram purificados por cromatografia de imuno-afinidade e utilizados em "Westem blots" e em cromossomos politênicos. Em imunoblots de glândulas salivares de larvas em diferentes idades do final do 4° estágio larval, uma banda de cerca de 66 kDa foi detectada. Com este lote de anticorpos, ainda não foi possível detectar o pequeno polipeptídio, produto do transcrito de 1,3 kb. Nos cromossomos politênicos, vários sítios, em diferentes idades, apresentaram intensa marcação fluorescente, incluindo alguns pufes de DNA do primeiro grupo, em atividade
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2006
- Data da defesa: 18.12.2006
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ABNT
SILVA, Juliana Aparecida Candido da. Caracterização parcial do gene EcR na glândula salivar de Bradysia hygida (Diptera, Sciaridae). 2006. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2006. . Acesso em: 17 out. 2024. -
APA
Silva, J. A. C. da. (2006). Caracterização parcial do gene EcR na glândula salivar de Bradysia hygida (Diptera, Sciaridae) (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Silva JAC da. Caracterização parcial do gene EcR na glândula salivar de Bradysia hygida (Diptera, Sciaridae). 2006 ;[citado 2024 out. 17 ] -
Vancouver
Silva JAC da. Caracterização parcial do gene EcR na glândula salivar de Bradysia hygida (Diptera, Sciaridae). 2006 ;[citado 2024 out. 17 ]
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