Imunolocalização de miosina Va fosforilada em melanócitos e outras células (2006)
- Authors:
- Autor USP: PRANCHEVICIUS, MARIA CRISTINA DA SILVA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: MIOSINA; ANTICORPOS MONOCLONAIS; IMUNOLOGIA CELULAR
- Language: Português
- Abstract: A miosina Va (Mva) é um motor molecular formado por um domínio cabeça que apresenta atividade ATPásica e se liga a F-actina, um domínio pescoço regulatório que se liga 4 a 6 calmodulinas e um domínio cauda com funções ainda não bem esclarecidas, mas que apresenta sítios capazes de interagir com organelas e complexos moleculares. A MVa e fosforilada (MVa-p) pela proteína quinase II dependente de calmodulina (CaMKII) sabre 'serina exp.1650' (seqüencia de camundongo) no domínio cauda globular. No presente estudo, geramos anticorpos monoclonais contra o peptídeo sintético, 'CL ind. 1644'RKRTSS(''PO' IND. 4')'IADE IND. 1654', contendo a serina 1650 fosforilada. Selecionamos clones que secretavam anticorpos monoclonais imunoespecíficos a proteína recombinante do domínio cauda globular da MVa (GST -GT), expressa em bactéria e fosforilada pela CamKII in vitro, mas não a sua forma não fosforilada. Através de ensaios de imunoprecipitação e/ou Western blot, verificamos a imunoreatividade dos anticorpos monoclonais com a cadeia pesada da MVa-p em homogenizados de células PC12 (pheochromocytoma de rato) e melanócitos ,B16- F10 (camundongo) selvagem para MVa, e de tecidos de cérebro de rato e pintainho. Os resultados demonstraram a presença de MVa-p endógena nestas celulas e tecidos. Ensaios de imunocitofluorescência com o monoclonal 9E6 (mAb 9E6) em várias linhagens celulares demonstraram a presença da MVa-p dentro do núcleo, em domínios intercromatínicos parecidos comspeckles e que contém partículas enriquecidas em fatores de splicing e processamento de RNA. Em confirmação, a profilina I e SC35, duas proteínas associadas com speckles, co-localizaram com MVa-p nestas estruturas. Entretanto, anticorpos contra colina p80 e SMN, marcadores para "Cajal bodies" e "Gems", outras partfculas intercromatínicas, não demonstraram co-localização com MVa-p. Ensaios controles de pré-adsorção do anticorpo monoclonal com GST -GT fosforilada in vitro demonstraram imunoespecifidade nos ensaios de imunocitoquímica. Bloqueio da transcrição pela actinomicina D promoveu um recrutamento maior da MVa-p para os speckles. Nas células em mitose a MVa-p foi detectada nos centrossomos nas etapas de metáfase e anáfase, mas não nas outras fases do ciclo celular. Quando estimulados pelo harmônio 'alfa'-MSH, os melanócitos B16-F10 tornam-se mais dendríticas e pigmentados. Nestas células verificamos a presença da MVa- p nas extremidades dendríticas e em cantato com o substrato. Os resultados indicam que a MVa é fosforilada par reações endógenas nestas células e nesta forma localiza aos domínios discretos no núcleo (speckles), no citoplasma e nos centrossomos (quando não há envelope nuclear intacto). Entretando, o papel da fosforilação da MVa nestas localidades subcelulares ainda precisam ser esclarecidas
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2006
- Data da defesa: 05.12.2006
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ABNT
PRANCHEVICIUS, Maria Cristina da Silva. Imunolocalização de miosina Va fosforilada em melanócitos e outras células. 2006. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2006. . Acesso em: 18 nov. 2024. -
APA
Pranchevicius, M. C. da S. (2006). Imunolocalização de miosina Va fosforilada em melanócitos e outras células (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Pranchevicius MC da S. Imunolocalização de miosina Va fosforilada em melanócitos e outras células. 2006 ;[citado 2024 nov. 18 ] -
Vancouver
Pranchevicius MC da S. Imunolocalização de miosina Va fosforilada em melanócitos e outras células. 2006 ;[citado 2024 nov. 18 ]
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