Tese

Interferência no complexo miosina-Va/DLC2/Bmf revela um novo mecanismo para a indução de apoptose em células de melanoma (2006)

• Authors:
  • Toledo, Tatiane de Carvalho Izidoro
  • Espreafico, Enilza Maria (Orientador)
• Autor USP: TOLEDO, TATIANE DE CARVALHO IZIDORO - FMRP
• Unidade: FMRP
• Sigla do Departamento: RBP
• Subjects: APOPTOSE; MUTAGÊNESE; GENOMAS; BIOLOGIA MOLECULAR; BIOLOGIA CELULAR
• Language: Português
• Abstract: As miosinas da classe V são motores moleculares de actina que atuam no transposte de organelas e em muitos outros processos celulares. A miosina-Va (MVa) tem sido implicada na prevenção de apoptose em células normais pelo seqüestro do fator pro-apoptótico Bmf no citoesqueleto de actina, através de sua interação com a cadeia leve de dineína 2 (DLC2). Sinais de dano, como perda de adesão celular, induzem a liberação do complexo DLC2-Bmf engatilhando a apoptose pela interação de Bmf com Bcl2 na mitocôndria. Um estudo prévio em nosso laboratório criou uma construção que codifica um pequeno fragmento da cauda medial da MVa (MVaf) e mostrou uma drástica redução no número de células transfectadas após transfecção, em linhagem celular de melanoma B16-F10, e, em adição, mostrou que este fragmento foi capaz e suficiente para interagir com DLC2. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a via e os mecanismos da morte celular induzida por MVaf. Características típicas de apoptose, como formação ativa de bolhas na membrana, marcação positiva para anexina-V e TUNEL, marcação difusa do citocromo-c, além da ativação de caspases 9 e 3, foram encontradas em células superexpressando MVaf provando seu papel pró-apoptótico. Com base em ensaios de interação protéica nos mostramos que MVaf é capaz e suficiente para interagir com DLC2 ou DLC1, sugerindo que a morte drástica observada seja fruto da liberação simultânea de Bmf e Bim de seus sítios de ancoragem. Ensaios de interação maiscomplexos incluindo Bmf e Bcl2, demonstraram que MVaf liga-se a DLC2 e impede a interação de DLC2-Bmf, permitindo que Bmf sozinha associe-se à Bc12, enquanto' que na ausência de MVaf, o complexo DLC2/Bmf/BcI2 é formado. MVaf também induziu a morte de células S91 (MY05A mutantes) e de células de melanoma humano WM35, WM278 e WM902. Para caracterizar os resíduos de aminoácidos da cauda medial da MVa envolvidos na resposta apoptótica e interação com ) DLC2, nos criamos várias novas construções de diferentes variantes de splicing. Nós suspeitávamos que o exon C, a porção central e maior de MVaf, fosse o maior responsável pela interação MVa-DLC2 e pela indução de morte, mas este fragmento não induziu níveis de resposta apoptótica comparáveis ao MVaf. Se a morte celular reflete a afinidade por DLC2, nossos resultados sugerem que os exons B e/ou D são requeridos para a interação, porém, a porção N-terminal do exon E parece suprir a ausência simultânea dos exons B e D. Finalmente, a investigação do perfil de expressão de moléculas envolvidas nesta via apoptótica mostrou que DLC2, isoformas BIBLIOTECA CENTRAl BH3-only e não-BH3-only de Bmf e Apaf-1 são diferencialmente expressas em várias linhagens de melanoma humano. Em conclusão, este trabalho identifica uma nova via e mecanismos de indução de morte apoptótica em linhagens metastáticas de melanoma, assegurando que esforços futuros para a determinação do espectro de ação e utilidade desta nova ferramenta molecularvalerão a pena
• Imprenta:
  • Publisher place: Ribeirão Preto
  • Date published: 2006
• Data da defesa: 29.09.2006

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How to cite

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• ABNT

  TOLEDO, Tatiane de Carvalho Izidoro. Interferência no complexo miosina-Va/DLC2/Bmf revela um novo mecanismo para a indução de apoptose em células de melanoma. 2006. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2006. . Acesso em: 09 nov. 2024.

• APA

  Toledo, T. de C. I. (2006). Interferência no complexo miosina-Va/DLC2/Bmf revela um novo mecanismo para a indução de apoptose em células de melanoma (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

• NLM

  Toledo T de CI. Interferência no complexo miosina-Va/DLC2/Bmf revela um novo mecanismo para a indução de apoptose em células de melanoma. 2006 ;[citado 2024 nov. 09 ]

• Vancouver

  Toledo T de CI. Interferência no complexo miosina-Va/DLC2/Bmf revela um novo mecanismo para a indução de apoptose em células de melanoma. 2006 ;[citado 2024 nov. 09 ]

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