Construção de baculovírus recombinantes contendo as fibras longa e curta do adenovírus 41 (2005)
- Authors:
- USP affiliated authors: MEHNERT, DOLORES URSULA - ICB ; HARSI, CHARLOTTE MARIANNA - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: MICROBIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Objetivos: Visando ao estudo das fibras longa (FL) e curta (FC) na atuação no reconhecimento de receptores e na penetração do adenovírus 41 (HAdV-41) na célula hospedeira, foram construídos os baculovírus recombinantes FL e FC. Método e resultados: O HAdV-41 foi cultivado em células HEK-293. Após 5 dias, o genoma viral foi extraído por meio da técnica de HIRT. A seguir, foram elaborados, para os genes FL (L5-1) e FC (L5-2), oligonucleotídeos específicos adicionados de sítios de restrição BamHI e Pst-1 para a FL e BamHI e EcoRI para a FC, visando realizar clonagens direcionais no plasmídeo pFast-Bac-Dual "pFBD" (Invitrogen). As seqüências de DNA de ambos os genes foram amplificadas do genoma viral por PCR. Por análise de restrição, os fragmentos foram confirmados e, a seguir, clonados em um plasmídeo intermediário pCR4® do kit TOPO-TA (Invitrogen). Após a confirmação da integridade e da fidelidade de cada seqüência, os plasmídeos pCR4® recombinantes foram digeridos com BamHI, Pst-1 e EcoRI. Os fragmentos com extremidades coesivas foram clonados separadamente no pFBD. Células competentes de E.coli DH10Bac, que contém o genoma do baculovírus AcMNPV na forma de plasmídeo (Bacmid) foram transformadas com os pFBD-FL e FC. A seleção das colônias positivas foi feita em meio LB ágar contendo K,G,T, IPTG e Blue-Gal. As colônias que apresentaram coloração branca foram analisadas por PCR. Os Bacmids recombinantes FL e FC foram purificados por método de extração porlise alcalina. Células Sf9 serão transfectadas com os Bacmids FL e FC para a obtenção dos baculovírus recombinantes e a posterior expressão das proteínas FL e FC. Conclusão: Todas as construções foram obtidas com sucesso, com ausência de mutações que comprometeriam a expressão de ambos os genes
- Imprenta:
- Publisher: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP
- Publisher place: São Paulo
- Date published: 2005
- Source:
- Título: Resumos
- Conference titles: Congresso do Instituto de Ciências Biomédicas
-
ABNT
SIQUEIRA-SILVA, Joselma et al. Construção de baculovírus recombinantes contendo as fibras longa e curta do adenovírus 41. 2005, Anais.. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2005. . Acesso em: 17 mar. 2026. -
APA
Siqueira-Silva, J., Yeda, F. P., Mehnert, D. U., & Hársi, C. M. (2005). Construção de baculovírus recombinantes contendo as fibras longa e curta do adenovírus 41. In Resumos. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP. -
NLM
Siqueira-Silva J, Yeda FP, Mehnert DU, Hársi CM. Construção de baculovírus recombinantes contendo as fibras longa e curta do adenovírus 41. Resumos. 2005 ;[citado 2026 mar. 17 ] -
Vancouver
Siqueira-Silva J, Yeda FP, Mehnert DU, Hársi CM. Construção de baculovírus recombinantes contendo as fibras longa e curta do adenovírus 41. Resumos. 2005 ;[citado 2026 mar. 17 ] - Infection kinetics of human adenovirus serotype 41 in HEK 293 cells
- Estudo de interação do HAdV-41 com a célula hospedeira
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