Fator regulador de nhe3 (NHERF): clonagem da proteína de células OKP e análise funcional das células com supressão da expressão de NHERF (2005)
- Autores:
- Autor USP: REBOUCAS, NANCY AMARAL - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: FISIOLOGIA
- Idioma: Português
- Resumo: Objetivos: Obter a sequência completa do cDNA de NHERF1 de células OKP e, após induzir o knock down de NHERF1 nestas células, analisar os níveis de expressão do PTH1R, a resposta celular ao estímulo com PTH (medida de AMPc, IP3, [Ca2+]i) e avaliar a expressão e atividade do NHE3. Material e/ou métodos: Comparamos as sequências de aminoácidos de NHERF1 de: Homo sapiens, Rattus novergicus, Mus musculus, Oryctolagus cuniculus para a identificação de regiões altamente conservadas. A partir de duas dessas regiões, foram desenhados oligonucleotídeos degenerados. Por meio de RT-PCR, em RNA total purificado a partir de células OKP, obtivemos então um segmento que considerávamos ser NHERF1. O produto desta PCR foi inserido em um vetor (pGEM-T easy) e clonado em bactéria XL1-Blue para o seu sequenciamento. O fragmento sequenciado possui 141 nucleotídeos e foi utilizado para o desenho de primers para clonagem das extremidades 5 e 3 do cDNA completo utilizando a técnica de RACE (FirstChoice RLM-RACE). Resultados: A extremidade 5 amplificada possui aproximadamente 1500pb e a extremidade 3 , 800pb. A união destes segmentos corresponde ao tamanho aproximado do mRNA, obtido através de Northern blot. O sequenciamento da extremidade 5 revelou que o cDNA clonado não é de NHERF1 mas sim de uma proteína da mesma família, a PDZK1. Conclusões: O tamanho do mRNA de NHERF1 em células de opossum ainda é desconhecido, porém, a de PDZK1 possui aproximadamente 2300 ribonucleotídeos
- Imprenta:
- Editora: Universidade de São Paulo
- Local: Ribeirão Preto
- Data de publicação: 2005
- Fonte:
- Título do periódico: Resumos
- Nome do evento: Simpósio Internacional de Iniciação Científica da Universidade de São Paulo, SIICUSP
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ABNT
YANAI, Priscila Rocha e BEZERRA, Camila Nogueira e REBOUÇAS, Nancy Amaral. Fator regulador de nhe3 (NHERF): clonagem da proteína de células OKP e análise funcional das células com supressão da expressão de NHERF. 2005, Anais.. Ribeirão Preto: Universidade de São Paulo, 2005. . Acesso em: 02 ago. 2024. -
APA
Yanai, P. R., Bezerra, C. N., & Rebouças, N. A. (2005). Fator regulador de nhe3 (NHERF): clonagem da proteína de células OKP e análise funcional das células com supressão da expressão de NHERF. In Resumos. Ribeirão Preto: Universidade de São Paulo. -
NLM
Yanai PR, Bezerra CN, Rebouças NA. Fator regulador de nhe3 (NHERF): clonagem da proteína de células OKP e análise funcional das células com supressão da expressão de NHERF. Resumos. 2005 ;[citado 2024 ago. 02 ] -
Vancouver
Yanai PR, Bezerra CN, Rebouças NA. Fator regulador de nhe3 (NHERF): clonagem da proteína de células OKP e análise funcional das células com supressão da expressão de NHERF. Resumos. 2005 ;[citado 2024 ago. 02 ] - Modulação transcricional do gene da isoforma 3 do permutador Na+/H+ (NHE3) nas acidoses metabólica e respiratória
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