Estudos moleculares das fosforribosil pirofosfato sintetases (2004)
- Authors:
- Autor USP: RODRIGUES, ELISANDRA MARCIA - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FFI
- Subjects: CONCRETO; BIOLOGIA MOLECULAR; QUIMIOTERÁPICOS
- Language: Português
- Abstract: Fosforribosil pirofosfato (PRPP) sintetases são enzimas de central importância em diversas vias metabólicas em todas as células. A enzima PRPP sintetase humana é constituída por um complexo composto de três subunidades catalíticas (PRSI, PRSII e PRSIII) e por proteínas homólogas de 39 e 41 kDa denominadas PRS Associated Proteins (PAPs) cuja função é desconhecida. A importância da PRPP sintetase em humanos, tem sido documentada pela identificação de uma desordem associada ao cromossomo X, resultando em uma atividade aumentada da PRPP sintetase.Em conseqüência se percebem concentrações elevadas na dosagem de ácido úrico, purino nucleotídeos levando ao desenvolvimento de patogenias como a gota e problemas neurológicos. Nesse sentido, realizaram-se estudos moleculares com o complexo enzimático que compõem as PRPP sintetases. Foram obtidos clones do gene hprsI em vetor de expressão pET29a(+) e a enzima foi expressa em bactérias Escherichia coli cepa BL21 (DE3). A proteína recombinante hPRSI foi purificada depois de fracionamento com sulfato de estreptomicina, sulfato de amônio e em coluna cromatográfica de troca iônica. O raio hidrodinâmico e o pI da enzima foram determinados usando respectivamente a técnica de espalhamento dinâmico de luz e o sistema Fast de eletroforese. A enzima foi caracterizada quanto ao seu enovelamento através da técnica de Dicroísmo Circular, apresentando um espectro característico de estrutura enovelada, composta predominantementepor a-hélices. Os genes hprsII e hpap41-1 que codificam respectivamente para as proteínas hPRSII e HPAP41-1 foram clonados no vetor de clonagem pCR4-TOPO. A proteína recombinante hPAP39 foi clonada em vetor pMAL-c2X em fusão com a proteína Maltose Binding Protein (MBP) e expressa em E. coli. A proteína hPAP39 está em fase de purificação e foi submetida ao experimento de Imunoblotting. Investigações estruturais destas enzimas poderão trazer informações fundamentais para o conhecimento da via biossintética, assim como para o desenvolvimento de inibidores específicos visando o tratamento das desordens a elas associadas
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2004
- Data da defesa: 10.03.2004
-
ABNT
RODRIGUES, Elisandra Marcia. Estudos moleculares das fosforribosil pirofosfato sintetases. 2004. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2004. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-18062008-085454/. Acesso em: 15 nov. 2024. -
APA
Rodrigues, E. M. (2004). Estudos moleculares das fosforribosil pirofosfato sintetases (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-18062008-085454/ -
NLM
Rodrigues EM. Estudos moleculares das fosforribosil pirofosfato sintetases [Internet]. 2004 ;[citado 2024 nov. 15 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-18062008-085454/ -
Vancouver
Rodrigues EM. Estudos moleculares das fosforribosil pirofosfato sintetases [Internet]. 2004 ;[citado 2024 nov. 15 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-18062008-085454/
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