Tese

Desenvolvimento de um vetor plasmidial para integração dirigida no locus do rDNA de Leishmania major (2003)

• Authors:
  • Toledo, Juliano Simões de
  • Cruz, Angela Kaysel (Orientador)
• Autor USP: TOLEDO, JULIANO SIMOES DE - FMRP
• Unidade: FMRP
• Sigla do Departamento: RGE
• Subjects: LEISHMANIA; VIRULÊNCIA
• Language: Português
• Abstract: Foi demonstrado, previamente, através de ensaios de transfecção transitória, que a superexpressão do gene mini-exon de Leishmania major, envolvido no processo de "trans-splicing", diminui nitidamente o padrão de virulência de linhagens originalmente virulentas em camundongos BALB/c "in vivo". No entanto, quando camundongos BALB/c foram infectados com linhagens atenuadas superexpressoras de miniexon, notou,se que não havia desenvolvimento de lesão até cerca de 10 semanas após a infecção. Depois deste período, possivelmente devido à perda da molécula epissomal, a linhagem atenuada reverteu ao seu fenótipo virulento. O desenvolvimento de vetores, com características integrativas é necessário para o desenvolvimento de linhagens atenuadas superexpressando estavelmente o gene miniexon, que poderão tomar,se possíveis candidatos a vacinas vivas. O objetivo do presente estudo foi desenvolver um vetor ponte ("shuttle vector") que se integre, por recombinação homóloga, no locus do rDNA cujo promotor, reconhecido pela RNA polimerase I (Pol I), promove transcrição constitutiva em altos títulos. O vetor foi projetado para dirigir a integração do cassete de expressão para o espaçador ribossomal homólogo do rDNA de Leishmania amazonensis, região à montante do promotor do rDNA, e manter o transgene sob controle do promotor heterólogo do rDNA de L. amazonensis. Em ensaios de transfecção transitória, o rDNA de L. amazonensis mostrou,se mais ativo em hospedeirosheterólogos do que em homólogos, e induziu alta taxa de transcrição de genes sob seu controle. Além da região promotora, o vetor contém um sítio aceptor de "splicing" (para que o mRNA produzido possa ser processado adequadamente durante o processo de maturação), uma marca de seleção (necessária para selecionar os clones de interesse), e sequências flanqueadoras que apresentam cerca de 95% de homologia com os elementos repetitivos do espaçador intergênico ribossomal .. (para que ocorra a integração sítio-dirigida no locus rDNA por recombinação homóloga)
• Imprenta:
  • Publisher place: Ribeirão Preto
  • Date published: 2003
• Data da defesa: 24.03.2003

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How to cite

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• ABNT

  TOLEDO, Juliano Simões de. Desenvolvimento de um vetor plasmidial para integração dirigida no locus do rDNA de Leishmania major. 2003. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2003. . Acesso em: 18 set. 2024.

• APA

  Toledo, J. S. de. (2003). Desenvolvimento de um vetor plasmidial para integração dirigida no locus do rDNA de Leishmania major (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

• NLM

  Toledo JS de. Desenvolvimento de um vetor plasmidial para integração dirigida no locus do rDNA de Leishmania major. 2003 ;[citado 2024 set. 18 ]

• Vancouver

  Toledo JS de. Desenvolvimento de um vetor plasmidial para integração dirigida no locus do rDNA de Leishmania major. 2003 ;[citado 2024 set. 18 ]

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