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Tese

Maturação in vitro de oócitos bovinos co-cultivados com células da granulosa produtoras de estradiol em meio quimicamente definido (2003)

  • Authors:
  • Autor USP: VIREQUE, ALESSANDRA APARECIDA - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RFI
  • Subjects: REPRODUÇÃO ANIMAL; FISIOLOGIA ANIMAL
  • Language: Português
  • Abstract: A comunicação bidirecional entre o oócito e as células da granulosa (CG) é um fator controlador, in vivo, da progressão do desenvolvimento folicular e maturação oocitária. Diversos sistemas de cultura in vitro demonstram que a presença de CG no meio de maturação resulta em aumento na competência para o desenvolvimento. Este trabalho foi voltado para testar a influência do sistema de cultura de CG produtoras de 17ß-estradiol, em meio definido, sobre a cinética da maturação nuclear de oócitos bovinos durante a MIV e a sinalização do oócito para a produção de esteróides (E2 e P4) por estas células. O delineamento experimental consistiu em dois experimentos. No experimento 1 (E1), as CG foram isoladas de folículos antrais (3-5mm de diâmetro). Após centrifugação e contagem, as células foram semeadas em placas de 4 fossas na densidade de 10 (6) células viáveis/fossa/ml de meio completo, contendo: PVA, androstenediona, insulina, IGF-I, aminoácidos não-essenciais, transferrina, selênio, bicarbonato de sódio, hepes e antibióticos. CG foram cultivadas até 96 horas em atmosfera de 5% de CO2 a 38,5°C. COCs imaturos foram aspirados de folículos de 2-8 mm e maturados na presença ou ausência de CG durante 8, 16 e 24 horas, nos seguintes tratamentos: TI: 'alfa'-MEM + PVA + CG; T2: 'alfa'-MEM + PVA (controle negativo); T3: TCM-199 + CG ('alfa'-MEM substituído por TCM-199 na cultura de CG após 96h de cultivo prévio); T4: TCM-199 (controle positivo suplementado com 10% FCS +E2 + FSH + LH). As configurações cromossômicas foram classificadas de acordo com seguintes estágios da meiose: GV, CCI, CCII, MI, AI e MII. No experimento 2 (E2), para analisar a atividade esteroidogênica da CG, E2 e P4 foram dosados nos meios coletados e estocados a -20°C após os tempos de MIV. Os dados referentes à concentração de E2 e P4 foram analisados pelo teste de regressão polinomial. Os dados da MIV foram analisados pelo .. teste do Qui-quadrado. Os resultados mostram que a morfologia das CG e produção de E2 foram mantidos até o final dos períodos de co-cultura. Não foram detectadas diferenças na produção de E2 entre os tratamentos. A secreção de P4 foi maior nos tratamentos que incluem as CG, porém os níveis de P4 não aumentaram com o tempo de co-cultura. Oócitos maturados em co-cultura com as CG em meio definido, mostraram maiores percentuais de CCI e CCII e baixas taxas de MI, após 8h de MIV. Entretanto, o retardo inicial da maturação foi compensado com 24h de MIV. Entre os grupos T1, T2 e T4 não foram verificadas diferenças estatísticas significativas nos percentuais de oócitos que completaram a maturação nuclear, após 24h de cultivo. Estes achados sugerem efeito inibitório das CG sobre a retomada da meiose e uma evolução mais lenta da maturação nuclear no sistema de MIV padronizado. Este método de MIV, desde que realizado em condições definidas, pode ser usado para estudar competência oocitária e o cross-talk oócito-CG
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 31.03.2003
    • How to cite
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    • ABNT

      VIREQUE, Alessandra Aparecida. Maturação in vitro de oócitos bovinos co-cultivados com células da granulosa produtoras de estradiol em meio quimicamente definido. 2003. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2003. . Acesso em: 27 mar. 2026.

    • APA

      Vireque, A. A. (2003). Maturação in vitro de oócitos bovinos co-cultivados com células da granulosa produtoras de estradiol em meio quimicamente definido (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

    • NLM

      Vireque AA. Maturação in vitro de oócitos bovinos co-cultivados com células da granulosa produtoras de estradiol em meio quimicamente definido. 2003 ;[citado 2026 mar. 27 ]

    • Vancouver

      Vireque AA. Maturação in vitro de oócitos bovinos co-cultivados com células da granulosa produtoras de estradiol em meio quimicamente definido. 2003 ;[citado 2026 mar. 27 ]

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