Isolamento, caracterização e expressão heteróloga do cDNA da lectina KM+ de Artocarpus integrifolia (2002)
- Authors:
- Autor USP: SILVA, LUIS LAMBERTI PINTO DA - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Subjects: FÁRMACOS; MEDICAMENTO
- Language: Português
- Abstract: Lectinas, proteínas que se ligam especificamente a carboidratos , podem ter diversos usos biotecnológicos. A lectina KM+ isolada de sementes de Artocarpus integrifolia (jaca), possui atividade mitogênica em células de baço de camundongo e induz a migração de neutrófilos. Além disso, KM+ pode ser útil como adjuvante para induzir proteção a algumas infecções. Nosso objetivo foi a clonagem e caracterização da seqüência do cDNA que codifica KM+ e a expressão heteróloga desta proteína. Uma biblioteca de cDNA de sementes de jaca com cerca de 13.000 clones foi construída. O "screening" foi desenvolvido por um método rápido e eficiente baseado em sucessivas amplificações por PCR em matriz. Combinações de três oligos degenerados, sintetizados a partir de regiões específicas da seqüência de aminoácidos de KM+, foram utilizados nos PCRs. Como resultado, dois clones de cDNA (pLL29 e pLL30), com a seqüência codificadora de KM+, foram isolados. Para a expressão de KM+ em E. coli em sua forma nativa, o cDNA foi subclonado no vetor pDEST14 do sistema Gateway (Life Technologies). Células da cepa BL21 SI de E. coli foram utilizadas, sendo detectado um baixo nível de expressão, após análise por western blot. Assim, duas outras estratégias foram testadas, a expressão em fusão com a proteína GST em E. coli e na forma nativa em S. cerevisiae. A fusão com GST resultou no aumento no nível de expressão. A expressão em levedura também foi bem sucedida, e em nível superior ao daforma nativa em E. coli. Tanto KM+ em fusão com GST, como o produzido em levedura, mantiveram a capacidade de serem reconhecidos pelo anticorpo
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2002
- Data da defesa: 24.05.2002
-
ABNT
SILVA, Luis Lamberti Pinto da. Isolamento, caracterização e expressão heteróloga do cDNA da lectina KM+ de Artocarpus integrifolia. 2002. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2002. . Acesso em: 27 dez. 2025. -
APA
Silva, L. L. P. da. (2002). Isolamento, caracterização e expressão heteróloga do cDNA da lectina KM+ de Artocarpus integrifolia (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Silva LLP da. Isolamento, caracterização e expressão heteróloga do cDNA da lectina KM+ de Artocarpus integrifolia. 2002 ;[citado 2025 dez. 27 ] -
Vancouver
Silva LLP da. Isolamento, caracterização e expressão heteróloga do cDNA da lectina KM+ de Artocarpus integrifolia. 2002 ;[citado 2025 dez. 27 ] - Sorting of the Alzheimer's disease amyloid precursor protein mediated by the AP-4 complex
- New insights on the role fo clathrin adaptor proteins in sorting of HIV-1 Env complex to virus assembly sites and maintenance of infectivity of newly synthesized viruses
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